[发明专利]一种茶多糖的分离纯化制备方法及抗肿瘤活性

摘要

一种茶多糖的分离纯化制备方法及抗肿瘤活性，其工艺步骤是：原料→高压气流破碎→过筛→微波辅助溶剂萃取→过滤→真空酶提→过滤→滤液(滤渣重复提取的滤液合并)→离心→径向高效色谱分离→超滤→真空浓缩→冷冻干燥→茶多糖，本发明的技术效果是：该制备方法提高了茶多糖的含量及抗肿瘤活性不清的不足，缩短提取时间、减少能耗、有效保存茶叶多糖生物活性。

主权项

1、一种茶多糖的分离纯化制备方法，其特征在于按下述方法制备：(1)原料：以粗老茶叶、低档茶叶或提取茶多酚后的茶叶废渣为原料；(2)高压气流破碎：将原料经50—60℃干燥、—40℃冷冻等预处理后，气流式超微粉碎对原料进行处理，其主要是通过气流的冲击、剪切、碰撞和摩擦对物料进行粉碎，要求气源压力为5MPa，粉碎压力为3—5MPa，从而使原料等活性成分的溶出量提高、粉体粒度减小，以改善原料中茶多糖提取过程中得率低等问题；(3)过筛：高压气流破碎后的原料进行分级过筛40—80目；(4)微波辅助溶剂萃取：采用微波提取主要使原料细胞内温度迅速上升，细胞内液水份汽化产生的压力使细胞膜和细胞壁急剧破碎，形成微小的孔洞，使可溶性物质快速溶出，微波辅助溶剂萃取最佳工艺条件为微波时间75秒，微波强度100％，固液比1∶15；(5)真空酶提：采用纤维素酶，耐温α-淀粉酶，为保持茶多糖的活性，采用真空低温水提、酶提二次结合法提取茶多糖，第一次在50℃、固液比1∶15、水提取30min，茶多糖提取率为2.33％，粗茶多糖的提取率为6.82％，以干重计，过滤后，滤渣用pH4.6的柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液加纤维素酶提取，酶提最佳工艺参数为55℃、固液比1∶14、酶用量2.2μL/g茶叶，120min；(6)径向高效色谱分离：茶多糖的凝胶柱纯化：将制备的初步纯化茶多糖溶解于蒸馏水中，过Sephadex G100凝胶柱，用10ml进样器逐滴将样液加入柱中，以0.1mol/L NaCl洗脱，流速1.5mL/min，自动分部收集仪每6min收集一管，逐管检测A280nm、A620，收集含糖部分，浓缩，备用，SephadexG100凝胶湿法装柱：取一定量的Sephadex G100凝胶，置于烧杯中，加入足量的蒸馏水浸泡，在100℃水浴中溶胀5到6小时，取出冷却后，于室温放置24小时继续溶胀，溶胀结束后，倾去表面的悬浮物，超声波脱气，即可装柱，本专利采用的是聚四氟乙烯的专用层析柱，在柱中加蒸馏水至一定高度，通过漏斗从柱的顶部将溶胀的凝胶加入柱中，同时柱的底部放水，边加边敲打柱身，直至填柱完成，注意要保持凝胶界面始终处在水面以下，装柱完成后，先用蒸馏水平衡一天，最后用洗脱液平衡，平衡时流速小于洗脱流速。HPLC鉴定纯度及其色谱条件的摸索：HPLC分析时，采用手动进样，每次进样量为20μL，洗脱流速为0.5mL/min。样品溶液和洗脱液分别用0.80μm和0.45μm的滤膜过滤；(7)超滤：选用中空纤维材料，工作压力为28psi，料液温度为29℃，料液pH为6.7，超滤处理40min，膜的渗透通量达最佳值为9.98LHM；(8)冷冻干燥：冷冻干燥条件，-80℃预冻8hr后，-80℃真空冷冻干燥6小时。