[发明专利]一种构建pROKⅡ植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物

摘要

一种构建pROK II植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物，它涉及一种植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物。它解决了目前构建pROKII双价载体的方法需要通过中间载体更换酶切位点才能实现，步骤繁琐、构建周期长的问题。方法：一、构建单价载体；二、制备两边带有EcoR I粘末端的35S－A－Tnos片段；三、制备两边带有EcoR I粘末端的开环B/pROK II；四、将步骤二和三得到的基因片段进行酶连接。通用引物为P35S－S1和Tnos－A1。本发明方法与目前构建pROKII双价载体的方法相比较，减少了连接和转化的次数具有步骤少、操作简单、构建周期短和不必更换酶切位点的优点，能够明显地提高工作效率。

主权项

1、一种构建pROK II植物双价表达载体的方法，其特征在于构建pROKII植物双价表达载体的方法按以下步骤实现：一、分别构建单价载体A/pROKII和B/pROK II；二、以单价A/pROK II质粒为模板、以P35S-S1和Tnos-A1为引物进行PCR，PCR产物再用EcoR I酶切，得到两边带有EcoR I粘末端的35S-A-Tnos片段；三、EcoR I酶切单价载体B/pROK II，得到两边带有EcoRI粘末端的开环B/pROK II；四、将步骤二和步骤三得到的基因片段进行酶连接，即得到pROK II植物双价表达载体；步骤二中通用引物P35S-S1序列为5’-GGCGAATTCCTGCAGGTCCCCAGATTAGCC-3’，通用引物Tnos-A1序列为5’GGCGAATTCCCGATCTAGTAACATAGATGAC-3’。