[发明专利]一种新型非病毒阳离子型基因载体的制备方法

摘要

本发明涉及一种新型非病毒阳离子型基因载体及其制备方法。首先使用氧阴离子聚合方法合成聚阳离子型电解质和含聚阴离子型电解质的嵌段共聚物，然后，通过静电力作用使聚阳离子型电解质与DNA在pH 7.4的盐溶液或缓冲溶液中相互复合，实现聚阳离子型电解质对DNA的包裹，且形成的“DNA/聚阳离子”复合物，其表面带正电荷，向体系中加入含聚阴离子型电解质的嵌段共聚物MePEO－b－PMAA，通过静电力作用与氢键作用使带负电荷的PMAA链段吸附在“DNA/聚阳离子”复合物表面，实现对复合物的包裹。本发明具有聚合反应条件温和、分子量可控以及分子量分布窄、基因载体制备方法简单、稳定性和生物相容性高、毒性低等特点。

主权项

1.一种新型非病毒阳离子型基因载体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)采用氧阴离子聚合法合成聚阳离子型电解质，即端基为生物基团的聚甲基丙烯酸-2-(烷基取代的氨基)乙酯；(2)采用氧阴离子聚合法合成含聚阴离子型电解质的嵌段共聚物，即聚乙二醇单甲醚与聚甲基丙烯酸的嵌段共聚物MePEO-b-PMAA；(3)将步骤(1)所得聚阳离子型电介质溶解于pH 7.4的缓冲溶液中，超声分散，缓慢滴加DNA水溶液，搅拌2小时以上，实现聚阳离子对DNA的包裹，形成DNA/聚阳离子复合物溶液，该步骤中聚阳离子型电介质中的N原子个数与DNA中P原子个数比为4∶1～10∶1；(4)将步骤(2)所得MePEO-b-PMAA共聚物溶解于pH 7.4的缓冲溶液中，超声分散，缓慢滴加到步骤(3)所制得的DNA/聚阳离子复合物溶液中，搅拌2小时以上，实现聚阴离子PMAA链段对DNA/聚阳离子复合物的包裹，该步骤中聚阴离子PMAA链段中羧基的数目与聚阳离子中氮原子的数目比为1∶1～6∶1。