[发明专利]一种提高DNA质量的土壤样品总DNA提取方法

摘要

本发明涉及土壤微生物学，具体说是一种能够提高DNA质量的土壤样品总DNA提取方法。具体为：向土壤样品中加入DNA提取缓冲液，再加入蛋白酶K，－65℃～65℃冻融后离心，弃沉淀，收集上清液；用等体积的苯酚－氯仿－异戊醇抽提、离心，取水相；再用氯仿－异戊醇抽提一次；加入醋酸钠和冷异丙醇，离心，收集DNA沉淀，经乙醇润洗后室温干燥，加入TE缓冲液溶解，得到DNA粗提液；向粗提液中加入DNA提取缓冲液，再加入等体积的苯酚－氯仿－异戊醇抽提，并重复上述沉淀、润洗、干燥、溶解等步骤，即获得较高质量的DNA。采用本发明方法可有效去除DNA中所含的一些杂质，使DNA的纯度以及质量获得显著提高。

主权项

1.一种提高DNA质量的土壤样品总DNA提取方法，其特征在于：1)向0.5-5.0g提取样品中加入1.0-5.5ml DNA提取缓冲液，再加入0.3-1.0g石英砂和5-50μl浓度为的蛋白酶K并混匀，置于漩涡振荡器中震荡10～20min；然后30-40℃水浴1-2小时；其中DNA提取缓冲液为50-150mM Tris-HCl，50-100mM EDTA，50-100mM磷酸盐缓冲液，0.5-2.5MNaCl，质量浓度为0.5-2％十六烷基三甲基溴化铵；2)将震荡后反应液中加入200-2000μl质量浓度为5-10％的十二烷基磺酸钠漩涡震荡后反复冻融3次，而后放入65℃水浴中温育1-2h，进而在室温条件下6000-10000×g离心10-30min，收集上清液，备用；3)在上述上清液中加入等体积的苯酚-氯仿-异戊醇混合液，摇匀至乳状，室温条件下6000-10000×g离心10-30min，收集上清液；而后再上清液中加入等体积的氯仿-异戊醇混合液，混匀至乳状，室温条件下6000-10000×g离心10-30min，收集上清液；4)将上述上清液中加入其0.2-0.3倍体积的醋酸钠和0.8-1.2倍体积冷异丙醇混匀，在4℃放置1-2h，10000-12000×g离心20-30min，收集DNA沉淀，沉淀经乙醇润洗2-3次，而后干燥；5)向干燥后的DNA沉淀中加入50-100μL TE缓冲液使其溶解，得到DNA粗提液；6)将上述粗体液中500-1000μL的DNA提取缓冲液，重复步骤3)-5)即可获得较高质量的DNA提取液。