[发明专利]基因转运载体的制备方法

摘要

本发明的目的在于提供一种有效地制备基因转运载体的方法，该方法中，经由转化而导入的基因所表达的蛋白质活性和表达效率均良好。此外，本发明的另一个目的是提供含有该制备方法制备的基因转运载体的药物组合物，以及含有该耐受菌的实体瘤治疗剂。本发明通过以下方案来解决本发明的课题：在由厌氧性微生物形成的基因转运载体中，使编码前述目标蛋白质的DNA 5′末端侧，进一步具有含有碱基序列的DNA片段，所述碱基序列编码由组蛋白样DNA结合蛋白N末端的第1位到至少第4位氨基酸序列构成的肽，所述厌氧性微生物可以在处于厌氧环境下的肿瘤组织内生长，并且能够表达(A)具有抗肿瘤活性的蛋白质、或(B)具有将抗肿瘤物质前体转化为抗肿瘤物质的活性的蛋白质。

主权项

1. 基因转运载体的制备方法，所述基因转运载体由厌氧性微生物构成，所述厌氧性微生物可以在处于厌氧环境下的肿瘤组织内生长，并且能够表达(A)具有抗肿瘤活性的蛋白质、或(B)具有将抗肿瘤物质前体转化为抗肿瘤物质的活性的蛋白质，其特征在于，该方法包括：制备融合质粒的工序(1)，所述融合质粒具有双歧杆菌属细菌的质粒片段和大肠杆菌的质粒片段；在所述融合质粒上整合含有启动子和终止子的DNA片段的工序(2)，所述启动子和终止子为来源于双歧杆菌属细菌的、编码组蛋白样DNA结合蛋白质的基因的启动子和终止子；在上述启动子和终止子之间整合DNA制备表达载体的工序(3)，所述DNA为(a)编码具有抗肿瘤活性的蛋白质的DNA、或(b)编码具有将抗肿瘤物质前体转化为抗肿瘤物质的活性的蛋白质的DNA；以及使用所述表达载体转化厌氧性微生物的工序(4)，在所述工序(3)的表达载体制备工序中被整合的、(a)编码具有抗肿瘤活性的蛋白质的DNA、或(b)编码具有将抗肿瘤物质前体转化为抗肿瘤物质的活性的蛋白质的DNA是，在该DNA的5′末端侧，进一步具有含有碱基序列的DNA片段，所述碱基序列编码由所述组蛋白样DNA结合蛋白N末端的第1位到至少第4位氨基酸序列构成的肽。