[发明专利]一种微生物转化法生产d－伪麻黄碱的方法

摘要

一种微生物转化法生产d－伪麻黄碱的方法，属于发酵与生物转化领域。本发明以1－苯基－2－甲氨基丙酮为转化前体，摩氏摩尔根氏菌为转化微生物，通过微生物培养、细胞收集、细胞固定化和生物转化步骤来生产d－伪麻黄碱。本发明的优点在于：1)直接利用微生物的转化作用生成d－伪麻黄碱，不需要化学拆分剂和化学拆分，既节省了成本，又利于环境保护；2)生物转化的效率高，专一性强，生成的d－伪麻黄碱e.e％＞99.0％；3)工艺简单，降低生产成本，基本相同的工艺和设备也可生产其它麻黄碱，如l－伪麻黄碱。

主权项

1.一种微生物转化法生产d-伪麻黄碱的方法，其特征在于以1-苯基-2-甲氨基丙酮为转化前体，摩氏摩尔根氏菌CMCC(B)49086为转化微生物，通过微生物培养、细胞收集、细胞固定化和生物转化步骤来生产d-伪麻黄碱；(1)微生物培养：出发菌株：摩氏摩尔根氏菌(Morganella morganii)CMCC(B)49086；培养基组成以g/L计为：葡萄糖20～35，酵母膏3.5～5.5，蛋白胨20～35，K2HPO4 2～4，MgSO4·7H2O 0.1～0.3，NaCl 1～3，起始pH为7.0；培养条件：在发酵罐中装入发酵罐体积百分比60％～70％的培养基，灭菌冷却后接入摩氏摩尔根氏菌CMCC(B)49086，接种量为5％～15％，搅拌转速80～150r/min，通风量为1∶0.2～1∶0.5v/v/m，培养温度35～37.5℃，培养时间42～50小时；(2)细胞收集：将所获得的发酵液在10000r/min的条件下离心分离，分离得到的菌体用0.1mol/L的磷酸缓冲液洗涤两次，收集菌体；(3)细胞固定化：收集的菌体加入到质量浓度2.5％～5.5％的海藻酸钠溶液中，混合均匀形成菌悬液，使溶液中的细胞浓度达到3×1010～6×1010个/mL，并静置2h，通过流动泵将菌悬液以0.5mL/min的速度滴加到2～3倍体积0.2mol/L CaCl2溶液中，4℃固定过夜；倒去CaCl2溶液，并用水冲洗海藻酸钙小球，洗去残留小球表面的CaCl2溶液，得到固定化细胞；(4)生物转化：转化液组成以质量百分含量计为：1-苯基-2-甲氨基丙酮0.02％～0.2％，葡萄糖0.5％～6％；将固定化细胞装入层析柱，转化液每小时进入层析柱的流量为层析柱体积的1/10～1/25；转化温度25～45℃。