[发明专利]静脉注射人乙型肝炎免疫球蛋白制备方法

摘要

本发明是从经乙肝疫苗免疫的献血员的血浆中分离的一种含有高活性抗乙肝病毒抗体的药物。具体为静脉注射人乙型肝炎免疫球蛋白制备方法。其特点是：经过融化血浆、pH调节、20％－25％乙醇反应、压滤、沉淀的溶解、调节pH值、乙醇反应、压滤、调节pH值、25％－28％乙醇反应、压滤、沉淀溶解、调节pH、层析、超滤、分装、低pH病毒灭活、纳米膜过滤除病毒、分装、成品检定合格后包装。二十二个步骤实现人抗体免疫球蛋白纯度可达98％以上，杂质更少，副反应更低。此工艺条件温和，对产品没有损伤，而且病毒灭活效果好，优于其他单位采用的巴氏灭活法或单一的低pH孵育法。本发明采用的是一种低温乙醇分离法与层析法和超滤法相结合的方法，使生产成本大大降低。

主权项

1.一种静脉注射人乙型肝炎免疫球蛋白制备方法，其特征在于：第一步、融化血浆：将抗-HBs抗体效价≥8IU/ml的原料血浆经75％酒精和注射用水消毒外袋后，割袋混合后置于带夹层的不锈钢反应罐中水浴融化，控制血浆温度在1.0℃～3.0℃之间；第二步、pH调节：用pH4.0醋酸缓冲液加入到血浆中，调节pH值到5.80～6.00反应，30分钟；第三步、20％-25％乙醇反应：继上一步，加95％乙醇，使乙醇浓度达20％-25％(V/V)；加酒精过程中逐渐降温，加完后，降温到-3.0℃～-5.0℃，反应30分钟；第四步、压滤：继上一步，向制品中加入1.0％(W/W)硅藻土助滤剂，搅拌30分钟进行压滤，压滤时控制前压≤1.5Kg/cm2，上清回收到反应罐，从压滤机回收沉淀进行下步；第五步、沉淀的溶解：继上一步，称量上步沉淀，置不锈钢反应罐中，加入3-5倍量预冷到0.0℃～2.0℃的注射用水，搅拌3小时以上，制冷反应液温度至0.0℃～2.0℃，搅拌至溶解；第六步、调节pH值：继上一步，加入pH4.0醋酸缓冲液，调节反应液pH值在5.05～5.25范围，反应30分钟；第七步、16％-18％乙醇反应：继上一步，向反应液加入95％乙醇，使反应液的乙醇浓度达16％-18％，在加入乙醇过程中，冷却反应液，最终温度达-4.5℃～-5.5℃，继续搅拌1小时即可压滤；第八步、压滤：继上一步，由压滤机压滤，压滤时控制前压≤1.5Kg/cm2，上清回收到反应罐进行下步，压滤机的沉淀弃做他用；第九步、调节pH值：继上一步，将上步的滤液缓慢加入1mol/L碳酸氢钠缓冲液，调节反应液pH值在7.20～7.60范围，反应30分钟，；第十步、25％-28％乙醇反应：继上一步，向反应液加入95％乙醇，使反应液的乙醇浓度达到25％-28％，在加入乙醇过程中，冷却反应液最终温度达-7.0℃～-10.0℃，静止1小时以上，即可压滤；第十一步、压滤：继上一步，由压滤机压滤，进行压滤前调节制品温度为-10.0℃～-12.0℃，压滤时控制前压≤1.5Kg/cm2，从压滤机上回收沉淀，称量沉淀备用；第十二步、沉淀溶解：继上一步，将上一步备用的沉淀用6-8倍量注射用水溶解，温度是0.0℃～2.0℃；第十三步、调节pH：继上一步，加入盐酸，调节溶解液pH在6.5～6.8之间，继续搅拌反应15min；第十四步、层析：继上一步，将溶胀好的凝胶用0.015M磷酸缓冲液平衡至出液pH6.5～6.8后，上样蛋白液收集流穿之蛋白峰，上样结束后，用0.015M磷酸缓冲液冲洗凝胶上的残余蛋白，合并上述两项蛋白液称重；第十五步、酸处理：继上一步，缓慢加入3％HCl调节蛋白液pH至3.5～4.0，继续搅拌30min；第十六步、.超滤：继上一步，将调整好的蛋白液抽至清洁的超滤桶中，启动超滤器，开始预浓缩，待蛋白浓度达50g/L左右，结束预浓缩称重，加入2℃～10℃注射用水，稀释蛋白浓度至20～50g/L，透析6-8倍水，透析结束后停止加水，将制品浓缩至蛋白浓度达80g/L以上，抽入洁净不锈钢桶内称量；第十七步、配制：用3％HCl调整浓缩后蛋白液的pH是3.8～4.4，加入麦芽糖后，补加注射用水，使制品最终含免疫球蛋白50g/L、麦芽糖100g/L，取样复测pH、pH是3.8～4.4，称重；第十八步、继上一步，将制品从压力桶经除菌滤器除菌分装于玻璃瓶中，盖好胶塞，记录除菌后制品量；第十九步、继上一步，低pH病毒灭活：将除菌后制品置于21℃～25℃库放置21天，逐日记录库温，灭活后的制品应及时移至2℃～8℃库保存；第二十步、继上一步，纳米膜过滤除病毒：经低pH病毒灭活后的制品，再经由纳米膜过滤器过滤于罐中；第二十一步、继上一步，可分装不同规格：500IU/瓶、2000IU/瓶、2500IU/瓶、5000IU/瓶、10000IU/瓶；第二十二步、继上一步，成品检定合格后包装。