[发明专利]雪莲多倍体的诱导方法

摘要

本发明涉及一种雪莲多倍体的诱导方法，该方法是针对雪莲特殊的生理特性，通过雪莲种子萌发产生无菌苗，然后将切除根叶后保留下来的无菌苗茎干部分接种于添加有二甲基亚砜和秋水仙素的出芽诱导培养基上进行诱导后，再转移到不含二甲基亚砜和秋水仙素的出芽诱导培养基上进行诱导出芽，经过秋水仙素处理的无菌苗抽出新芽，植株外观与对照苗差异显著，然后对无菌苗的茎尖生长点做染色体检测以确定染色体的倍性，从而得到了雪莲多倍体植株。

主权项

1、一种雪莲多倍体的诱导方法，其特征在于该方法按下列步骤进行：a、将雪莲种子先用75％乙醇表面消毒20sec-50sec，然后用0.1％HgCl2溶液消毒7min-15min，接着用15％H2O2溶液消毒15min-50min，将消毒后的种子用灭菌水漂洗4-7次，再播种于MS培养基上，每瓶MS培养基播种10-15粒种子，7-10天后雪莲种子萌发产生无菌苗；b、选择生长30d-50d的无菌苗，将其根部、叶片完全切除，仅保留茎干部分；c、将切割后保留下来的无菌苗茎干部分接种于添加有二甲基亚砜2％-5％，秋水仙素浓度为100-500mg·L-1的出芽诱导培养基上，诱导2d～4d，出芽诱导培养基配方为MS+6-BA 0.1-0.9mg·L-1 +TDZ0.3-1.1mg·L-1；d、无菌苗茎干诱导2d-4d后，转移到不含秋水仙素与二甲基亚砜的出芽诱导培养基MS+6-BA 0.1-0.9mg·L-1+TDZ0.3-1.1mg·L-1 上诱导出芽，20天后，经过秋水仙素处理后的无菌苗茎干部分抽出新生芽，植株外观与对照苗差异显著，然后对新生芽的茎尖生长点做染色体检测以确定染色体的倍性；e、染色体的检测：切取新生芽茎尖生长点，先置蒸馏水中于0-4℃冰箱处理12hr-24hr，然后转移到0.002mol·L-18-羟基喹啉溶液处理6hr-12hr，接着用卡诺氏固定液为乙醇∶冰乙酸＝3∶1室温下固定12-24hr，用蒸馏水漂洗后，在58℃1mol·L-1HCL溶液中解离处理10min-15min，再用45％乙酸软化5min-15min，之后再用蒸馏水洗净，将其置于改良苯酚品红溶液中染色10min-30min，压片，最后在显微镜下镜检观察即可。