[发明专利]一种具有产氢特性的光合细菌菌株的培养方法

摘要

一种具有产氢特性的沼泽红假单胞菌菌株的培养方法，其特征在于采用如下步骤：(1)采集菌源：采集农田、污水沟等的上表层淤泥为菌源，过滤或静置样品，收集滤液或上清液；(2)沼泽红假单胞菌菌株的增殖培养：取上述滤液或上清液放入无菌的培养瓶中，同时按与之1比7～7比7的比例加入新鲜灭菌的培养基到培养瓶中，并充入氩气排除空气，进行静置厌氧培养，菌种培养中以日光灯为光源，光照度为2000勒克斯～5000勒克斯，培养温度为25℃～35℃，培养6～12天，直到培养液颜色逐渐变紫红，在培养瓶壁上有红色菌吸附生长时止；(3)沼泽红假单胞菌菌株的富集培养：取上述红色培养液的中下层液体加入灭菌的干净培养瓶中。

主权项

1、一种具有产氢特性的沼泽红假单胞菌菌株的培养方法，其特征在于采用如下步骤：(1)采集菌源：采集农田、污水沟等的上表层淤泥为菌源，过滤或静置样品，收集滤液或上清液；(2)沼泽红假单胞菌菌株的增殖培养：取上述滤液或上清液放入无菌的培养瓶中，同时按与之1比7～7比7的比例加入新鲜灭菌的培养基到培养瓶中，并充入氩气排除空气，进行静置厌氧培养，菌种培养中以日光灯为光源，光照度为2000勒克斯～5000勒克斯(lx)，培养温度为25～35℃，培养6～12天，直到培养液颜色逐渐变紫红，在培养瓶壁上有红色菌吸附生长时止；(3)沼泽红假单胞菌菌株的富集培养：取上述红色培养液的中下层液体加入灭菌的干净培养瓶中，按与之1比7～7比7比例加入已灭菌的新鲜培养基，充入氩气获得厌氧环境，将培养瓶置于恒温培养箱中，以日光灯或发红光的LED灯为光源，光照度为2000勒克斯～5000勒克斯(lx)，培养温度为25～35℃，再次光照静置转化培养3～10天，进一步淘汰非光合细菌，增强光合细菌的生长和适应能力，再取中下层的红色培养液重复本步骤2次以上，直到光学显微镜下观察到大量的优势菌种为杆形或椭圆形细菌为止；(4)沼泽红假单胞菌菌株富集培养液的梯度稀释液的制备：取步骤(3)得到的沼泽红假单胞菌富集培养液用灭菌的蒸馏水按10-1 -10-9级数进行稀释，分别得到稀释倍数为10-1、10-2、……10-10的梯度稀释液；(5)沼泽红假单胞菌菌株的分离纯化：采用梯度稀释平板菌落分离法，利用双层平板固体培养基为菌种的生长繁殖提供厌氧环境；首先在无菌的培养皿中制作下层基础营养固体平板培养基，待下层基础营养固体平板培养基冷却后分别在各固体平板培养基上接种步骤(4)得到的沼泽红假单胞菌菌株富集培养液的10-3-10-10梯度稀释液，将固体平板培养基表面放置5-20分钟，倒入40～45℃的仅含琼脂且含量为1.5％-2.0％的上层覆盖液，盖上培养皿皿盖，放置冷却至上层琼脂覆盖液完全凝固，再将培养皿置于25℃～35℃，光照度为2000lx～7000lx的光照恒温培养箱中光照培养4～10天；待长出菌落后，挑选生长快，菌落形态单一，且菌落颜色为红色，细胞形态为椭圆形者为目的菌种；(6)挑取步骤(5)得到的目的菌种，按步骤(4)的方法进行稀释，再按步骤(5)的方法进行培养基的制备和接种，重复进行3次以上的分离纯化，直到观察到生长的菌落形态一致，菌落颜色为紫红色且光学显微镜下观察到细胞形态分别为椭圆形即判定得到相应的纯菌种。