[发明专利]一种利用麦芽根复合磷酸酯酶制备5’－核苷酸的方法无效
| 申请号： | 200710063910.4 | 申请日： | 2007-02-14 |
| 公开（公告）号： | CN101012469A | 公开（公告）日： | 2007-08-08 |
| 发明（设计）人： | 赵红玲;贾乃堃;刘朵花;黎高沃 | 申请（专利权）人： | 北京燕京中科生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/28 | 分类号： | C12P19/28 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 | 代理人： | 王朋飞 |
| 地址： | 10130*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种利用麦芽根复合磷酸酯酶酶解RNA来制备5’－核苷酸的方法，该方法采用液体RNA作为底物，节约了成本；将酶液和RNA经过预处理可以快速达到最适酶解条件，有效地利用复合磷酸酯酶的活性，抑制了磷酸单酯酶、3’－磷酸二酯酶等杂酶的活性，使酶解率达到70％以上，5’－核苷酸产量大于15mg/ml，产品成分稳定且含量得到了提高；本发明方法利用微滤、超滤和纳滤替代离心、酸去蛋白和真空减压浓缩，纯化了产品，简化了工艺。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 麦芽 复合 磷酸酯 制备 核苷酸 方法 | ||
【主权项】：
1、一种制备5’-核苷酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)麦芽根复合磷酸酯酶的制备和预处理：取新鲜的麦芽根按照质量比1∶7～12加水，粉碎，浸提4-8h后，固液分离，酶液加热至30℃-60℃备用；2)液体酵母RNA预处理：液体酵母RNA加水稀释至浓度为2.5％-5.5％，调节pH 8.0-10.0，配置成RNA溶液，将RNA溶液升温至70℃-100℃备用；3)酶解：将上述预处理后的酶液和RNA溶液混合，酶解液RNA终浓度在2％-4％，pH在4.5-6.0之间，酶解液酶活50-150u/ml，温度在65℃-75℃之间，保温1.5-3.0小时，90℃-100℃灭活；4)分离纯化。
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