[发明专利]一种鉴定外周血DNA肝癌相关P53基因249位密码子突变的多重PCR的试剂盒

摘要

一种鉴定外周血DNA肝癌相关P53基因249位密码子突变的多重PCR的试剂盒，由分离包装的引物混合物、PCR反应液和分子量标记物组成，其特征是所述引物混合物是由公共顺向引物、野生型特异性引物、747G/T突变型引物、746G/T突变型引物、745A/G突变型引物共同组成。本发明通过上述引物的设置，可以使扩增出的产物长度不一致，从而能够鉴定样本是否存在P53基因249位密码子突变，并能了解是否为我们预先设计的特异性上游引物对应的突变类型。进而提供了新的用于鉴定外周血DNA肝癌相关P53基因249位密码子突变的多重PCR的试剂盒。

主权项

1、一种鉴定外周血DNA肝癌相关P53基因249位密码子突变的多重PCR的试剂盒，由分离包装的引物混合物、PCR反应液和分子量标记物组成，其特征是所述引物混合物是由公共顺向引物、野生型特异性引物、747G/T突变型引物、746G/T突变型引物、745A/G突变型引物共同组成，其中，野生型特异性引物的序列为：5`-TGTGATGATGGTGGGGATGGGCCTC-3`747G/T突变型引物的序列为：5`-TGATGATGGTGGGGATGGGACTC-3`746G/T突变型引物的序列为：5`-ATGATGGTGGGGATGGGCATC-3`745A/G突变型引物的序列为：5`-GATGGTGGGGATGGGCCCC-3`公共顺向引物的序列为：5`-TAGGTTGGCTCTGACTGTA-3`在所述引物混合物中，各引物之间的重量比如下：公共顺向引物∶745A/G突变型引物∶746G/T突变型引物∶747G/T突变型引物∶野生型特异性引物＝1∶0.82∶0.93∶1.14∶0.89；所述分子量标记物按以下方式制备：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳得到所述野生型引物和747G/T突变型引物、746G/T突变型引物、745A/G突变型引物的四种PCR产物，经过测序验证其片段大小分别为：99，97，95，93bp，将以上四种PCR产物以重量相等的比例混合后即得到所述分子量标记物。