[发明专利]一种快速测定青霉素酰化酶酶活的方法无效
| 申请号： | 200710048113.9 | 申请日： | 2007-11-13 |
| 公开（公告）号： | CN101201356A | 公开（公告）日： | 2008-06-18 |
| 发明（设计）人： | 张嗣良;施晓疌;储炬;庄英萍;王永红;袁中一 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学 |
| 主分类号： | G01N33/543 | 分类号： | G01N33/543;G06F19/00 |
| 代理公司： | 上海光华专利事务所 | 代理人： | 许亦琳;余明伟 |
| 地址： | 200237*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及酶活的检测方法，公开了一种快速测定青霉素酰化酶酶活的方法，在不破碎细胞的情况下使用酶标仪采用动态法检测酶活，获得动态反应曲线，用动态曲线线性回归后获得的斜率及截距计算酶活。此外，还对温度对酶活测定的影响作了简单研究，并设置了修正系数方便于室温的快速测定。本发明的方法步骤简单，准确度高，节约成本，且适合检测高密度发酵生产的青霉素酰化酶酶活，具有很好的推广价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 快速 测定 青霉素 酰化酶酶活 方法 | ||
【主权项】：
1.一种快速测定青霉素酰化酶酶活的方法，包括下列步骤：a)取青霉素酰化酶基因工程菌发酵液用pH7.4-7.8的磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液稀释适当倍数；b)用pH7.4-7.8的磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液配制NIPAB溶液；c)取步骤a获得的稀释液与步骤b获得的NIPAB溶液先后加入酶标板，控制反应体系中NIPAB的量为过量；d)在37℃，用酶标仪振动混匀下，在405nm处动态曲线方式连续检测吸光度4-5分钟，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标获得动态反应曲线；e)动态曲线减去空白板与空白样后线性回归得斜率k与截距b；f)计算酶活：![]()
其中：酶活力单位为U/Lp：标准曲线的斜率V0：反映体系总体积，单位为mlV1：酶液体积，单位为ml。
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