[发明专利]一种豆科植物活性多肽的分离提取方法及其氨基酸序列

摘要

本发明公开了一种豆科植物活性多肽的分离提取方法，该方法包括豌豆蛋白粗提物的制备；对粗提物的离子交换树脂层析分离；对分离组分的反相HPLC层析纯化。本发明对豌豆中具有对粮储害虫有毒杀作用的蛋白成分进行跟踪，进行逐步的分离、纯化，并对此活性组分的生理生化特性、蛋白质组成等进行分析，为下一步进行DNA的异源重组，构建出能够表达活性成分的基因工程菌提供必要的基础。

主权项

1、一种豆科植物活性多肽的分离提取方法，其特征在于包括如下步骤：(1)豌豆蛋白粗提物的制备：将豌豆粉与pH4.9醋酸缓冲液搅拌混合，配制成浓度为8.0％的混合液，在温度低于25℃的条件下，混合液进行离心分离，取上清液进行膜超滤，再将滤液离心，收集上清液进行冷冻干燥，可得到粗提物冻干粉；(2)对粗提物的离子交换树脂层析分离：将粗提物冻干粉与60％的甲醇混合，混合浓度为10％；在4℃下搅拌，然后离心分离，收集上清液，真空干燥；然后再添加水和Tris-HCl缓冲液，使Tris-HCl的终浓度为50mM；用阴离子交换层析柱分离可溶的蛋白组分；吸附蛋白组分在缓冲液A与缓冲液B的混合作用下析出；洗脱缓冲液流速为20ml/min，在280nm波长下收集DEAE II；所述缓冲液A为50mM pH8.8 Tris-HCl；所述缓冲液B为25mM pH8.8 Tris-HCl和250mM NaCl；(3)对分离组分的反相HPLC层析纯化：经阴离子交换层析柱分离得到的活性组分DEAE II，再进行反相HPLC层析纯化分离；对PT吸收峰组分洗脱液进行收集，真空干燥，得到豆科植物活性多肽PT蛋白组分。