[发明专利]一种甘蓝种子遗传纯度的快速鉴定方法

摘要

本发明公开了一种甘蓝种子遗传纯度的快速鉴定方法，属于生物技术领域。其步骤是：提取甘蓝基因组DNA，利用筛选出的特征引物NAUISR1034和NAUSSR1011进行PCR扩增，将扩增后的DNA片段分别进行琼脂糖凝胶和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，分别电泳0.8－1和2－2.2小时后，拍摄电泳图谱。通过比较和分析电泳图谱中DNA片段序列差异形成的多态性扩增片段大小与位置差异，进行甘蓝“新夏50”杂种遗传纯度的鉴定。本发明的检测方法具有标记稳定，准确性高，不受被测样品生长阶段与环境影响，成本低，且可在整个生长季节都可进行等优点。

主权项

1.甘蓝品种‘新夏50’种子遗传纯度的鉴定方法，包括以下步骤：(1)提取甘蓝幼苗基因组DNA；(2)采用ISSR引物NAUISR1034：AGAGAGAGAGAGAGAGAA和SSR引物NAUSSR1011正向引物：GCAAACGATTTGTTTACCCGNAUSSR1011反向引物：CGTGTAGGGTGATCTAGATGGG以甘蓝基因组DNA为模板，进行PCR扩增；(3)将扩增后的DNA片段，分别进行琼脂糖(ISSR扩增产物)和非变性聚丙烯酰胺凝胶(SSR扩增产物)电泳检测；(4)对电泳结果进行分析，只有同时具有亲本特异条带的单株才为真正的杂交种，缺少其中的任意一个条带即记为假杂种，计算其种子纯度，其中：ISSR引物NAUISR1034产生大小为600bp的母本特异标记NAUISR1034600，产生大小为1900bp的父本特异标记NAUISR10341900；SSR引物NAUSSR1011产生大小为210bp的母本特异标记NAUSSR1011210，产生大小为260bp的父本特异标记NAUSSR1011260。