[发明专利]B7－H4在肺癌细胞中的表达与应用

摘要

一种B7－H4在肺癌细胞中的表达与应用，属于生物技术领域。本发明通过RT－PCR和FACS流式细胞仪等方法对B7－H4在人的肺腺癌细胞株(A549、H1299、H23、Wark)、人的肺鳞癌细胞株(U1752)、人的肺癌大细胞株(U1810)中的mRNA和蛋白表达进行了分析；RT－PCR扩增的片断用2％的GTG琼脂糖凝胶分离和获取，将其克隆和测序；通过免疫组化来检测NSCLC病人肺癌组织中B7－H4的表达水平，分析它们的表达与临床参数之间的关系。本发明所述的B7－H4在肺癌细胞中的表达方法可应用于外周非淋巴组织的癌变治疗药物中。

主权项

1. 一种B7-H4在肺癌细胞中的表达方法，其特征在于，步骤如下：(1)细胞株及其培养人的肺腺癌细胞株：A549、H1299、H23、Wark；人的肺鳞癌细胞株U1752；肺癌大细胞株U1810，培养液为RPMI1640+10％FCS；(2)表达方法①、肺癌组织常规石蜡包埋、切片；②、H.E染色及观察；③、免疫组化检测B7-H4和CD45的表达：采用连续切片，切片分实验组和空白对照组，免疫组染色采用生物素-链菌卵白素-过氧化物酶方法，福尔马林固定手术标本，石蜡包埋，切片厚度4um，二甲苯脱蜡，阶梯酒精内水化，900w微波加热2min，进行抗原修复，0.3％的H2O230min阻断内源性抗原，10％正常的血清孵育阻断背景非特异性染色，加入一抗：鼠抗B7-H4过夜、CD45抗体室温1～3小时、生物素包被的马抗鼠抗体孵育30分，卵白素连接的过氧化物酶孵育30分种，DAB孵育，苏木素复染；④、RT-PCR检测肺癌细胞株A549、H1299、H23、Wark、U1752和U1810中B7-H4的表达；⑤、人B7-H4的一个剪接形式的克隆和测序；⑥、流式细胞仪分析肺癌细胞株A549、H1299、H23、Wark、U1752和U1810表面B7-H4的表达；⑦、统计分析。