[发明专利]高脂杜氏藻的诱变选育方法

摘要

高脂杜氏藻的诱变选育方法，涉及一种杜氏藻。提供一种采用紫外线诱变，并经乙醚等试剂提取筛选，获得脂类含量高的高脂杜氏藻的诱变选育方法，高脂杜氏藻为巴氏杜氏藻HL。将灭菌后的培养液冷却接种杜氏藻得杜氏藻藻液，光照培养再测定OD₆₃₀值；将原出发株涂在培养基上，置紫外灯下照射诱变后培养；挑取诱变处理的单藻落培养，离心弃培养液，收集鲜藻烘干，抽提，烘干提取物并称重，选出突变藻株，与原出发株接种培养，离心收集藻细胞，烘制成藻粉，测藻粉总脂含量，确定总脂含量高于原出发株的突变藻株；复筛所得高脂突变株藻粉中的脂类，验证突变藻株为高脂杜氏藻突变株。

主权项

1.高脂杜氏藻的诱变选育方法，其特征在于高脂杜氏藻为巴氏杜氏藻HL(Dunaliellabardawil var.HL)，已于2007年06月13日由中国典型培养物保藏中心登记入册，保藏编号为CCTCC NO：M207081；包括以下步骤：1)配制培养液；2)将培养液分装封口；3)把封装好的培养液灭菌；4)取出灭菌过的培养液，冷却至室温，接种杜氏藻，得杜氏藻藻液；5)将杜氏藻藻液置于光照培养箱中培养；6)每1～3天取杜氏藻藻液测定OD630值，绘制其生长曲线；7)将处于指数生长期的杜氏藻原出发株，涂在琼脂人工海水培养基上，置超净工作台中紫外灯下照射进行诱变后，于无光暗处培养；9)按照步骤5培养10～25天；9)挑取诱变处理的20～100个单藻落于装有2～6mL培养液的试管中，按照步骤5培养5～20天；10)将试管中的杜氏藻培养液转入装有15～30mL培养液的50mL锥形瓶，锥形瓶应塞上棉花塞或封好纱布，培养10～20天；11)离心弃培养液，收集杜氏藻鲜藻，烘干，加入2～4mL的无水乙醚进行抽提，烘干乙醚提取物并称重，选出比杜氏藻原出发株脂类含量高，通过显微镜观察藻和测定藻液的OD630 值，能正常生长的突变藻株；12)将步骤11筛选出的突变藻株以及杜氏藻原出发株接种于装有2～3L培养液的敞口瓶或光生物反应器中，按步骤5培养10～20天；14)离心收集藻细胞，烘制成藻粉，冷冻保存；14)按照通行的索氏脂类检测法测定步骤11第二次扩大培养所得藻粉的总脂含量，即复筛，比较步骤11筛选和复筛所得的结果，确定总脂含量高于杜氏藻原出发株的突变藻株；15)以氯仿替换乙醚抽提复筛所得高脂突变株藻粉中的脂类，比较所得氯仿沥青质A的含量，验证所得突变藻株为高脂杜氏藻突变株；16)对高脂杜氏藻突变株进行10聚寡核苷酸引物随机扩增多态性分析，统计扩增出的总条带和共有条带数，计算高脂杜氏藻突变株和原出发株之间的遗传相似性系数。