[发明专利]一种改进的丛枝菌根孢子密度快速测定方法

摘要

菌根生物技术是目前应用于煤矿区生态治理的一种新方法，菌根孢子密度是衡量菌根生态适应性的标准之一。孢子密度的测定采用的优化方法是湿筛倾析染色法。优化方案中采用曲利本蓝对基质中的孢子、菌丝进行染色，发现经染色后基质中的孢子及其菌丝呈紫色，在双目显微镜下观测孢子的数量和形态更容易识别，计数的精度和速度明显提高，降低了孢子密度测定过程中的人为误差。使用本发明的方法对孢子密度常规测定方法--湿筛倾析法作了改进发明，以提高了试验测定的精度和速度，为检验菌根技术在野外大规模的生态应用效果提供了一种孢子密度快速测定方法。

主权项

1.一种丛枝菌根真菌孢子密度快速测定方法，其特征在于包括以下步骤：(1)称取一定重量的土壤标本，放在容器内用水浸泡20-30分钟，使土壤松散，如果土壤粘性很大，可加入常规的土壤分散剂；(2)选用一套洁净的、具有孔径为0.5-0.034微米的土壤筛，按孔径由大至小的顺序从上到下依次叠放，最底层用一固体物垫着，使筛面稍微倾斜；(3)用玻璃棒搅动浸泡土壤的水溶液，停置几秒钟后，使大的石砾和杂物沉淀下去，然后将悬浮的土壤溶液慢慢地倒在最上一层的土壤筛上，倾倒时，集中倒在筛面的一个点上，避免整个筛面都沾有土壤溶液；(4)用清水依次轻轻冲洗停留在筛面上的筛出物，以免在上层粗筛面的剩留物中残留有丛枝菌根真菌孢子，用洗瓶将停留在筛面上的筛出物轻轻冲洗到一个清洁的培养皿里面；(5)用洗瓶将停留在筛面上的筛出物轻轻冲洗到一个干净的试管内，滴加曲利本蓝染色剂，放在90℃水浴锅或烘箱中加热半小时，进行染色；(6)将染色后的滤液通过细筛，并冲洗筛上的滤物，洗去染色剂，将筛出物放在干净的培养皿里，在冲洗下来的筛出物中，除许多细的沙砾和杂质外，其余为不同直径的丛枝菌根真菌的孢子；(7)将筛出物放在双目实体解剖显微镜下观察，可观测到紫色孢子。