[发明专利]一种壳聚糖纳米粒的制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种壳聚糖纳米粒的制备方法和应用，涉及一种非病毒基因转移载体——壳聚糖纳米粒。制备方法包括：1)壳聚糖处理：取壳聚糖；溶于醋酸；调节pH值；滤膜除菌；无菌纯化水稀释；2)DNA溶液处理：取DNA溶液为50～150mg/LDNA溶液100μL；溶于硫酸钠溶液；3)水浴、混合：水浴；混合，涡流震荡；制备完后，于室温下静置2h，分装，冷冻抽干备用。壳聚糖纳米粒能携带多种目的基因，尤其适合用于糖尿病基因治疗载体的制备。本发明生物相容性好，无毒，来源经济；可控制转染效率及细胞的摄取量；可抵抗各种补体以及酶的破坏，转移效率高；可作为缓释、控释的骨架材料；容易操作。

主权项

1、一种壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于包括下列步骤：1)壳聚糖处理①取壳聚糖(1)取壳聚糖(1)为0.05～0.15g；②溶于醋酸(2)将上述步骤①的壳聚糖溶于0.5～1.5％的醋酸100mL，搅拌至全部溶解；③调节pH值(3)将氢氧化钠溶液调节溶液pH值至5.0～6.0；④滤膜除菌(4)用孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，4℃储存备用；⑤无菌纯化水稀释(5)临用前用无菌纯化水稀释至0.01～0.03％，溶液最终含壳聚糖纳米粒为0.01～0.03％(W/V)、乙酸4～6mmol/L；2)DNA溶液处理①取DNA溶液(7)取DNA溶液(7)为50～150mg/L DNA溶液100μL；②溶于硫酸钠溶液(8)将上述步骤①的溶液加入20～40mmol/L的硫酸钠溶液100μL中，共200μL；3)水浴、混合①水浴(6)将上述无菌纯化水稀释至0.01-0.03％的壳聚糖纳米粒溶液200μL和上述DNA硫酸钠溶液200μL，各在50-60℃水浴加热12～18min；②混合，涡流震荡(9)将上述步骤①的溶液迅速混合，涡流震荡0.8～1.2min，反应终体积≤500μL；③制备完后，于室温下静置2h，分装，冷冻抽干备用；上述百分比是质量百分比。