[发明专利]慢病毒载体介导IKKα基因RNA干扰转基因小鼠模型及它的用途

摘要

本发明公开了慢病毒载体介导IKKα基因RNA干扰转基因小鼠模型及它的用途。实验构建了针对IKKα基因RNAi(剔降)的慢病毒载体，并将载体导入小鼠受精卵卵周隙，获得携带该载体的转基因小鼠模型，经PCR鉴定首建鼠平均阳性率为15％。通过逆转录PCR和实时定量PCR法检测表明：转基因小鼠外周血细胞IKKα mRNA表达水平明显降低。利用该模型可在体内研究IKKα基因的生物学功能及该基因的异常表达与肿瘤之间的关系，从而寻找抗肿瘤药物。

主权项

1.一种经剔降IKK-α基因序列并合成两条寡聚核苷酸链：5′-CACCGCAGGCTCTTTCAGGGACACGAATGTCCCTGAAAGAGCCTGC-3′5′-AAAAGCAGGCTCTTTCAGGGACATTCGTGTCCCTGAAAGAGCCTGC-3′退火后结构如下：ds Oligo 5′-CACCGCAGGCTCTTTCAGGGACACGAATGTCCCTGAAAGAGCCTGC-3′ ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||3′-CGTCCGAGAAAGTCCCTGTGCTTACAGGGACTTTCTCGGACGAAAA-5′与2μl ENT/U6vector(0.5ng/μl)连接、转化TOP10感受态菌，质粒抽提得pU6-IKKα-knockdown expression vector，pU6-IKKα-knockdownexpression vector、pLP1 vector、pLP2和pLP/VSVG在293FT细胞中完成病毒包装，得慢病毒：KKα-RNAi-lentivirus，该病毒可整合到宿主细胞的染色体基因组中，并产生具有RNA干扰效应的发夹状双链RNA(shRNA)，含有针对IKKαmRNA的正义链和反义链以及loop环的IKKα基因RNAi转基因的小鼠模型。