[发明专利]可修复仔猪胰岛细胞的生产方法有效
| 申请号： | 200610107058.1 | 申请日： | 2006-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN1920009A | 公开（公告）日： | 2007-02-28 |
| 发明（设计）人： | 张俊英;王斌;王章存;范清堂 | 申请（专利权）人： | 郑州福恩生物工程技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/06 | 分类号： | C12N5/06 |
| 代理公司： | 郑州中民专利代理有限公司 | 代理人： | 姜振东 |
| 地址： | 450001河南省郑州市高新区*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 一种可修复仔猪胰岛细胞的生产方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：(1).供体的选择：供体选择刚出生、未哺乳健康仔猪，无菌下开腹取胰腺，去除包膜、血管、结缔组织并置4℃ Hank`s液中；(2).胰岛细胞分离及纯化：通过机械研磨使胰岛与外分泌组织分离。再通过Dextran不连续密度梯度离心，得到胰岛细胞；(3).胰岛细胞培养：应用无血清微球载体进行CO2培养，采用RPMI－1640培养液，并加入纤维连接蛋白，在培养过程中，将胰岛细胞包于APA生物膜内形成微球，在恒温37℃、CO2培养箱内培养，48小时换一次培养液，最终得到活性好、纯度高的微囊新生仔猪胰岛细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 修复 仔猪 胰岛 细胞 生产 方法 | ||
【主权项】：
1、一种可修复仔猪胰岛细胞的生产方法，其特征在于：它包括以下工艺步骤：(1)、胰岛细胞供体的选择：供体选择刚出生、未哺乳健康仔猪，无菌下开腹取胰腺，去除包膜、血管、结缔组织并置4℃ Hank`s液中；(2)、胰岛细胞的分离及纯化：通过机械研磨使胰岛与外分泌组织分离。再通过Dextran不连续密度梯度离心，得到胰岛细胞，取样镜检形态、活性纯度、数量、成活率，从分离到纯化结束时间控制在4-6小时；(3)、胰岛细胞的培养：应用无血清微球载体进行培养，采用RPMI-1640培养液，培养液中不含牛血清，并加入纤维连接蛋白(FN)，加入量按培养基体积每升加FN 5---30mg，在培养过程中，将胰岛细胞包于A-P-A生物膜内形成微球，适时检测微囊形态、活性、计数，在恒温37℃CO2培养箱内培养，48小时换一次培养液，定期取培养液测定胰岛素含量；观察记录胰岛细胞在微囊内分化、生长、分泌胰岛素功能来判定终止培养时间，最终得到活性好、纯度高的微囊新生仔猪胰岛细胞。
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