[发明专利]组合发酵生产D－乳酸工艺

摘要

本发明涉及的是一种组合发酵技术生产D－乳酸工艺，可以根据该菌株在生长、代谢的不同阶段对氧气、活性因子及不同碳源、氮源需求量的差异，进行有氧、微氧、厌氧三段组合发酵。其工艺为：(1)平板培养：将乳酸杆菌接到肉汤培养基中培养；(2)种子培养：将平板培养的乳酸杆菌接种到含30ml液体种子培养基中培养；(3)摇瓶培养：将种子培养基培养的乳酸杆菌接种到摇瓶培养基中进行培养；(4)发酵培养：将摇瓶培养基培养的乳酸杆菌接种到发酵罐中的发酵培养基中培养，进行有氧、微氧、厌氧三段组合发酵技术，温度控制在30～43℃，添加无菌中和剂将发酵体系pH值控制在5.0～7.5，发酵25～38h，产酸达到7.5％～13.1％。

主权项

1、一种组合发酵生产D-乳酸工艺，其特征在于其工艺为：(1)平板培养：采用肉汤培养基培养，将乳酸杆菌接种到肉汤培养基中，培养温度37℃，培养时间15～30h；(2)种子培养：将平板培养的乳酸杆菌接种到液体种子培养基中培养6～15h，pH控制在5.0～7.5，发酵温度37℃，培养转速为150～250rpm；(3)摇瓶培养：将种子培养基培养的乳酸杆菌接种到摇瓶培养基中进行培养，接种量为5～15％(v/v)，摇瓶培养温度37℃，pH控制在5.0～7.5，培养转速为150～250rpm；(4)发酵培养：将摇瓶培养基培养的乳酸杆菌接种到发酵罐中的发酵培养基中培养，发酵培养基由组合发酵微生物培养所需的碳源、氮源配制而成，根据该菌株在生长、代谢的不同阶段对氧气、活性因子及不同碳源、氮源需求量的差异，进行有氧、微氧、厌氧三段组合发酵技术，在第一阶段为有氧发酵阶段，氧气、空气或两者的混合物以总流速为1～2.5L/min混合流入发酵罐的发酵培养基中，搅拌转速为200～400rpm，维持溶氧浓度(DO)为70～100％，采用中和剂将pH值维持在5.0～7.5，温度控制在30～43℃，补料，好氧培养10～20h，当细胞浓度即光密度(O.D.)达到20～40时；转入第二阶段微氧发酵阶段，维持溶氧浓度(DO)在5～20％，微氧培养0.5～5h；再转入第三阶段厌氧产酸发酵阶段，停止供氧，温度控制在30～43℃，添加无菌中和剂将发酵体系pH值控制在5.0～7.5，发酵25～38h，产酸达到7.5％～13.1％。