[发明专利]检测脱氧核糖核酸的单核苷酸多态性的方法有效

专利信息
申请号: 200610097381.5 申请日: 2006-11-03
公开(公告)号: CN1952178A 公开(公告)日: 2007-04-25
发明(设计)人: 罗光华;郑璐 申请(专利权)人: 罗光华;郑璐
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 213003江苏省常州市局*** 国省代码: 江苏;32
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摘要: 发明涉及一种检测脱氧核糖核酸的单核苷酸性质的方法。该方法确定待测DNA片段的一条单链上的第一序列和第二序列、且第一序列可能具有变异位点,制备分别对应于第一序列和第二序列的敏感探针和锚定探针、且敏感探针的一端仅一端结合有荧光报告基团和淬灭基团中的一种、锚定探针的一端仅一端结合有荧光报告基团和淬灭基团中的另一种,制备与待测DNA片段相对应的一对引物,然后进行聚合酶链式反应,再将探针杂交于扩增后的待测DNA片段的含有第一序列和第二序列的单链上,再测定融解温度,即可对待测DNA片段所属的脱氧核糖核酸的单核苷酸是否具有单核苷酸多态性进行判断。本发明具有成本较低、操作方便、检测时间较短的特点。
搜索关键词: 检测 脱氧核糖核酸 核苷酸 多态性 方法
【主权项】:
1、一种检测脱氧核糖核酸的单核苷酸多态性的方法,具有以下步骤:①确定要对某种生物的脱氧核糖核酸的某种基因进行检测,也就是确定待测DNA片段,而该待测DNA片段的一条单链上具有第一序列和第二序列,所述的第一序列是指该序列中的某一个特定核苷酸可能发生变异的一段核苷酸序列,第二序列是指与第一序列核苷酸相靠近的一段核苷酸序列;②制备可称为敏感探针的一种寡核苷酸探针、以及制备可称为锚定探针的另一种寡核苷酸探针;所述敏感探针互补于与待测DNA片段的第一序列相对应的野生型基因的相应DNA片段的相应序列、或互补于与待测DNA片段的第一序列相对应的突变型基因的相应DNA片段的相应序列,敏感探针的一端仅一端结合有荧光报告基团或淬灭基团;所述锚定探针与待测DNA片段的第二序列互补,锚定探针的一端仅一端在敏感探针结合有荧光报告基团时结合有淬灭基团、在敏感探针结合有淬灭基团时结合有荧光报告基团;敏感探针的融解温度的值低于锚定探针的融解温度的值;③制备合适的两个寡核苷酸引物,该两个寡核苷酸引物中的一个寡核苷酸引物与上述待测DNA片段的具有第一序列和第二序列的单链的一端互补,该两个寡核苷酸引物中的另一个寡核苷酸引物与上述待测DNA片段的另一条单链的另一端互补;④由过量的底物、DNA聚合酶、过量的寡核苷酸引物、以及含有待测DNA片段的脱氧核糖核酸组成反应体系,还加入敏感探针和锚定探针,且敏感探针和锚定探针的数量基本相同;在上述反应体系中进行聚合酶链式反应,而使上述待测DNA片段扩增;⑤对上述进行聚合酶链式反应后的体系加热,直至使扩增后的待测DNA片段变性而使其双链解开,然后降温而使敏感探针和锚定探针杂交于扩增后的待测DNA片段的含有第一序列和第二序列的单链上,因为荧光报告基团与淬灭基团相互临近且数量相当,所以若对探针上的荧光报告基团进行激发,则其所被激发出的荧光被结合于同一条链上的另一个探针的荧光淬灭基团淬灭,对外不显示荧光;⑥加热杂交后的体系,结合于待测DNA片段的单链上的第一序列上的敏感探针会先脱落下来,若此时对探针上的荧光报告基团进行激发,则因为敏感探针的脱落而对外显示出荧光,随着温度的继续升高,敏感探针脱落增加,荧光强度也随着增强,将其中的荧光强度增量变化最大时的温度作为融解温度;若该融解温度值与同样条件下野生型基因的相应的DNA片段的相应的融解温度值之间有明显的差别,则说明所测脱氧核糖核酸具有单核苷酸多态性。
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