[发明专利]N－乙酰－β－氨基葡萄糖苷酶诊断试剂盒及N－乙酰－β－氨基葡萄糖苷酶活性浓度的测定方法

摘要

本发明涉及一种酶循环扩增法的N－乙酰－β－氨基葡萄糖苷酶诊断试剂盒，同时本发明还涉及测定N－乙酰－β－氨基葡萄糖苷酶活性浓度的方法原理、试剂的组成及成分，属于医学检验测定技术领域。本发明的试剂盒主要成分包括：缓冲液、苯基－β－乙酰氨基葡萄糖苷、儿茶酚氧化酶、还原型辅酶及稳定剂；通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列的酶(偶)促反应，再将反应物置于紫外/可见光分析仪下，检测主波长340nm处吸光度下降的速度大小，从而测算出N－乙酰－β－氨基葡萄糖苷酶的活性浓度。采用本发明完全可以通过紫外/可见光分析仪器得出所需的测定结果。

主权项

1.一种酶循环扩增法(Enzymatic Recycling Method)的N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性浓度测定方法，其方法原理如下：苯基-β-乙酰氨基葡萄糖苷 乙酰氨基葡萄糖苷酶石碳酸+ 乙酰氨基葡萄糖苷石碳酸+氧 儿茶酚氧化酶 苯醌(Quinone)+水苯醌+还原型辅酶→石碳酸+辅酶将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度下降的速度，测算出N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性浓度大小测定结果。N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.30；NAG；N-Acetyl-β-glucoseaminidase)作为作用酶，功能为将苯基-β-乙酰氨基葡萄糖苷酶解产生石碳酸。儿茶酚氧化酶(catechol oxidase EC 1.10.3.1)作为循环酶和还原型辅酶共同作用：儿茶酚氧化酶的酶促氧化作用产生苯醌(Quinone)；还原型辅酶再将苯醌再次变回石碳酸，使石碳酸不断地被重复循环利用，同时还原型辅酶不断地氧化成辅酶，在340nm波长下发生吸光度下降，从而可以测算出N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性浓度。 还原型辅酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一种。