[发明专利]中国荷斯坦牛红毛基因快速检测方法及检测试剂盒无效
| 申请号： | 200610070569.0 | 申请日： | 2006-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN101016563A | 公开（公告）日： | 2007-08-15 |
| 发明（设计）人： | 李秋玲;李建斌;王洪梅 | 申请（专利权）人： | 山东奥克斯生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 济南圣达专利商标事务所 | 代理人： | 李健康 |
| 地址： | 250100山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种中国荷斯坦牛红毛基因的检测方法，包括牛血样品采集，提取基因组DNA，设计特异性引物，PCR扩增，限制性内切酶消化，凝胶电泳之步骤；其中：所述引物是：1：5’－CATCCCTGACGGGCTCTTTCTC－3’，2：5’－AGCACCTCTTGGAGCGTCTTCC－3’；所述PCR扩增的条件为：95℃预变性5min，然后94℃变性30s，62℃复性30s，72℃延伸30s，35个循环，最后72℃延伸7min；所述限制性内切酶消化用等量的限制性内切酶MspI和限制性内切酶MspAlI。本发明还同时公开了红毛基因快速检测试剂盒，包括PCR试剂盒、RFLP试剂盒两部分。本发明方法简便、快速，而且结果准确、可靠，为优质种公牛纯度鉴别及奶牛育种提供了有力的手段，对优化我国奶牛育种技术体系，保证牛群种质，保持奶业的可持续发展，具有重要意义。 | ||
| 搜索关键词： | 中国 斯坦 牛红毛 基因 快速 检测 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.一种中国荷斯坦牛红毛基因的检测方法，包括牛血样品采集，提取基因组DNA，设计特异性引物，PCR扩增，限制性内切酶消化，凝胶电泳之步骤；其特征在于：所述特异性引物序列是：1：5’-CATCCCTGACGGGCTCTTTCTC-3’，2：5’-AGCACCTCTTGGAGCGTCTTCC-3’；所述PCR扩增的反应体系为：15μL，其中含有基因组DNA 100ng，引物0.2mM，dNTPs 0.2mM，MgCl21.5mM，Taq酶1U；所述PCR扩增的条件为：95℃预变性5min，然后94℃变性30s，62℃复性30s，72℃延伸30s，35个循环，最后72℃延伸7min；所述限制性内切酶消化用等量的限制性内切酶MspI和限制性内切酶MspAlI。
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