[发明专利]一种用于溶菌酶亲和层析的新型硅胶负载表面大孔甲壳素基质

摘要

本发明公开了一种用于溶菌酶亲和层析的新型硅胶负载表面大孔甲壳素基质。本发明首先将壳聚糖负载在硅胶上，采用含有环氧基团、水溶性的无机硅烷试剂γ－环氧丙氧丙基三甲氧基硅烷作为交联剂制备硅胶负载交联壳聚糖微珠，乙酰化后得到硅胶负载甲壳素基质。基质粒径可通过改变所用硅胶支载材料的粒径方便调节。本发明壳聚糖微珠的交联是在水溶液中进行的，过程简单，无需任何有机溶剂。采用水溶性的聚乙二醇20000作为致孔剂，所得基质具有优良的表面大孔结构，适于蛋白质亲和层析。本发明采用氧化法脱去壳聚糖上未乙酰化的游离氨基，基质的非特异性吸附小。本发明制备的硅胶负载表面大孔甲壳素基质可用于鸡蛋清中溶菌酶的亲和纯化，一步纯化可得到高比活力的溶菌酶。

主权项

1、一种用于溶菌酶亲和层析的新型硅胶负载表面大孔甲壳素基质，其特征是该亲和层析基质是通过以下步骤制备的：——a在1mol/L 100mL醋酸溶液中加入壳聚糖2-4g，致孔剂聚乙二醇5-15g，磁力搅拌30min，过滤；——b在滤液中加入无机硅烷试剂γ-环氧丙氧丙基三甲氧基硅烷2-8mL，磁力搅拌30min；——c向溶液中加入60-80目硅胶50g，搅拌均匀，超声40min后倾倒到培养皿中，搅拌均匀，室温静置48h后，40℃烘干；——d将所得固体置于0.5mol/L 100mL氨水溶液中，80℃抽提，每2h更换氨水溶液，8h后将固体取出，蒸馏水洗至中性，40℃烘干；——e将所得固体置于95mL甲醇中，加入5mL醋酸酐，搅拌2h，所得固体蒸馏水洗至中性；——f固体置于0.1mol/L盐酸溶液中，搅拌使其悬浮，慢慢加入亚硝酸钠溶液，搅拌2h后用碱将溶液调至中性，蒸馏水彻底清洗所得固体，40℃烘干，得硅胶负载表面大孔甲壳素基质。