[发明专利]细胞核质转移受体蛋白13多克隆抗体制备方法

摘要

核质转移蛋白受体13蛋白的表达、纯化及其抗体制备方法，涉及一种蛋白表达、纯化及抗体制备，尤其是涉及一种核质转移蛋白受体13(imp 13)抗体的制备方法。提供一种以在生物体内合成的有生物活性的imp 13的全长蛋白做抗原制备核质转移受体蛋白13抗体的方法。步骤为：将全长importin 13基因插入到表达质粒pGEX－4T－2，然后转化到大肠杆菌中，在BL21中表达目的蛋白；经层析法纯化得到有生物活性的蛋白：用纯化后的蛋白做抗原去免疫兔子，得到了imp 13的抗体，用不完全福氏佐剂加强，测效价，取血，得到相应的抗血清。

主权项

1、细胞核质转移蛋白13抗体制备方法，其特征在于其步骤为：1)将表达全长细胞核质转移受体蛋白13蛋白质的重组表达质粒pGEX-4T-2-imp 13转化到大肠杆菌BL21中；2)培养转化重组质粒的BL21到OD值为0.5～1.0；3)在培养的大肠杆菌BL21中加入IPTG至0.1～0.5mM，诱导；4)将诱导后的菌体离心收集，用PBS重悬，先加入DTT至终浓度1～10mM，后加溶菌酶溶菌，再超声波破碎，把破碎后的菌液离心，收集上清；5)将上清与Glutathione-Sepharose-4B的beads混合，孵育后离心收集beads；6)用谷胱甘肽洗脱下细胞核质转移受体蛋白13；7)用纯化后的细胞核质转移受体蛋白13作为抗原免疫兔子，得到细胞核质转移受体蛋白13的抗体，用不完全福氏佐剂加强；8)测抗细胞核质转移受体蛋白13的血清效价，取血，得到相应的抗血清。