[发明专利]人类重组可溶性肿瘤坏死因子受体－Ⅱ的制备方法无效
| 申请号： | 200510122433.5 | 申请日： | 2005-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN1986790A | 公开（公告）日： | 2007-06-27 |
| 发明（设计）人： | 徐斌;孟磊;文峰;任倩;韩忠朝 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院血液学研究所泰达生命科学技术研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C12N15/12;C12N1/21;C07K14/435;C07K1/14;C12R1/19 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300857天津市经济技*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人类重组可溶性肿瘤坏死因子受体－II的制备方法，步骤为：用SEQ IDNo.3、SEQ ID No.4所述的核苷酸序列作为PCR引物，进行扩增，获得表达TNFR－II的基因片段；通过NcoI和XhoI双酶切，将基因片段克隆到原核表达载体pET－22b(+)中，构建表达载体pET－TNFR－II；将重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3)内获得工程菌；诱导后的工程菌经离心，收集，抽提，再次离心，取上清，经层析纯化后，获得一种人类重组可溶性肿瘤坏死因子受体－II，本发明的方法制备的人类重组可溶性肿瘤坏死因子受体－II，不是以包涵体的形式表达，因此具有生物学活性并且生产成本低。 | ||
| 搜索关键词： | 人类 重组 可溶性 肿瘤 坏死 因子 受体 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种人类重组可溶性肿瘤坏死因子受体-II的制备方法，其特征是由如下步骤组成：用SEQ ID No.1所述的核苷酸序列和SEQ ID No.2所述的氨基酸序列设计SEQ ID No.3、SEQID No.4所述的核苷酸序列作为PCR引物，进行PCR扩增，获得表达TNFR-II的基因片段；通过NcoI和XhoI双酶切位点，将表达TNFR-II的基因片段克隆到原核表达载体pET-22b(+)中，构建表达载体pET-TNFR-II；将重组载体pET-TNFR-II经转入大肠杆菌BL21(DE3)内获得工程菌；诱导后的工程菌，经低温离心，收集菌体，使用低温低渗缓冲液抽提，再次低温离心，取上清，经层析纯化后，获得一种人类重组可溶性肿瘤坏死因子受体-II。
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