[发明专利]基于连接的选择性扩增方法

摘要

本发明提供了一种扩增目的核苷酸序列的方法。该方法涉及聚合和连接。含通用引物序列的上游寡核苷酸探针和下游寡核苷酸探针与靶核酸序列杂交后，聚合酶填补上下游寡核苷酸探针之间的含目的核苷酸序列的间隔序列，再由连接酶封闭上游寡核苷酸探针延伸序列3’末端与下游寡核苷酸探针5’末端的缺口。以连接产物作为模板，利用通用引物进行PCR扩增。该方法的特征在于，通过增大间隔序列，以提高目的核苷酸序列的选择自由度，并且相邻近的多个多态位点或特异核苷酸序列，仅需设计一对寡核苷酸探针就可扩增这些多态位点或特异核苷酸序列。该技术可应用于DNA序列改变和表达谱的检测。

主权项

1.一种扩增目的核苷酸序列的方法，该方法包括：(1)形成聚合-连接反应混合物，包括：(i)靶核酸序列；(ii)寡核苷酸探针，包括上游寡核苷酸探针，其3’末端至少有一部份与靶核酸序列第一个末端的第一个区段基本上互补，下游寡核苷酸探针，其5’末端至少有一部份与靶核酸序列第二个末端的第二个区段基本上互补，目的核苷酸序列位于第一个区段与第二个区段之间的间隔序列中，其中上游寡核苷酸探针5’末端和下游寡核苷酸探针3’末端各分别含有一段通用引物序列；(iii)至少4种不同的核苷酸碱基；(iv)聚合酶及连接酶；(2)利用通用引物，扩增已连接的上游寡核苷酸探针延伸序列和下游寡核苷酸探针的连接产物，产生大量的扩增子；(3)检测所述的扩增子，以显示所述的目的核苷酸序列存在于所述样本中。