[发明专利]奶牛结核病的快速检测方法及特异性单克隆抗体BovIFN－γ－4A3、BovIFN－γ－4G5的构建方法

摘要

奶牛结核病的快速检测方法及特异性单克隆抗体BovIFN－γ－4A3、BovIFN－γ－4G5的构建方法，涉及奶牛结核病的检测技术领域。用重组菌诱导表达的融合蛋白GST－BovIFN－γ免疫Balb/c小鼠，通过杂交瘤技术研制出抗BovIFN－γ的单克隆抗体，即获得特异性单克隆抗体BovIFN－γ－4A3和BovIFN－γ－4G5。单抗BovIFN－γ－4A3属于IgG2b亚类，单抗BovIFN－γ－4G5属于IgM亚类，能特异性识别BovIFN－γ。本发明在制备了rBovIFN－γ的基础上，研制出抗BovIFN－γ的单克隆抗体，以单克隆抗体为基础建立快速检测病牛血细胞分泌的IFN－γ量，从而判断奶牛的结核病感染情况。该方法检测步骤简单、敏感性高、快速，整个检测过程只需4小时。

主权项

1、奶牛结核病的快速检测方法，其特征在于采用22mM的碳酸钠稀释特异性单克隆抗体或多克隆抗体，并包被酶标板，4℃保存；取1.5ml新鲜牛全血加肝素抗凝剂，在4小时内分装于2孔24孔细胞培养板中，分别加入加100ul PBS和100ul牛结核杆菌素，所述牛结核杆菌素的PPD 300ug/ml，37℃，5％CO2培养箱培养16小时，取其上清作为待检样本；将待检样本加入酶标板，37℃作用1小时，然后以PBS-T洗涤3-5次，再加入工作浓度酶标记的抗BovIFN-γ的单克隆抗体，经37℃温浴1小时，以PBS-T洗涤3-5次，再以酶的底物溶液OPD显色，测定OD490的值；如果用PPD刺激的细胞上清测得的OD490比PBS刺激的细胞上清的OD490大0.1，则判该样本为牛结核阳性，否则判为阴性。