[发明专利]一种发酵法制备15NL－色氨酸的方法

摘要

本发明涉及一种发酵法制备利用微生物发酵的方法制备¹⁵NL－色氨酸。本发明的方法工艺简单，产量较高，与有机合成法以及酶法比较，N同位素替代容易、纯度可以达到99％，同位素丰度大于98％，适合大规模生产。

主权项

1.一种发酵法制备15N L-色氨酸的方法，采用15N邻氨基苯甲酸作为前体物，15N-硫酸铵作为氮源，葡萄糖为碳源，经微生物发酵合成、分离纯化制备，具体的步骤和方法为：(1)菌株预处理将酵母或大肠杆菌在活化培养基中活化20-30小时；将活化的菌体铺到含有5-50mg/l苯菌灵的活化固体培养基中，30℃培养2～3天，用生理盐水洗下菌体，将得到的菌悬液再铺到含有5-50mg/l苯菌灵的活化固体培养基中，30℃培养2～3天，将这一过程反复至少5次；用pH6.8的磷酸缓冲液将菌体洗下，以0.1-20mg/ml的量加入硫酸二乙酯，在30℃反应20-30min，加水稀释到使诱变反应停止，然后经紫外线照射30-180s，将照射后的液体涂布在含有4mg/ml的5-甲基-DL-色氨酸和质量含量为0.2％邻氨基苯甲酸的活化固体培养基上，待菌体长出后，挑取单个菌落经发酵，得到预处理好的菌株；(2)发酵合成将步骤(1)预处理获得的菌株接种到种子培养基中，在30℃培养15-24h，将得到的种子液接种到发酵培养基中，30℃发酵合成，直到15N L-色氨酸产量不再下降为止，发酵合成期间，从24h后开始添加15N邻氨基苯甲酸的乙醇水溶液、15N硫酸铵水溶液、葡萄糖水溶液，使发酵液中添加的15N邻氨基苯甲酸达到0.1-5g/l，15N硫酸铵达到0.5-5g/l、葡萄糖达到10-100g/l；(3)分离纯化步骤(2)的发酵液经离心分离，用草酸调节上清液pH为2-5，经阳离子树脂吸附、氨水洗脱，将获得的洗脱液蒸发脱氨浓缩至干，加入溶剂萃取脱色，得到15N L-色氨酸粗产品，再经大孔树脂脱色、冷冻干燥得到15N L-色氨酸。