[发明专利]巨细胞病毒的检测和定量方法

摘要

提供了CMV的检测和定量方法，其特征是：在一定温度下，通过一步操作，可迅速地对来自CMV的β2.7基因的mRNA进行扩增、检测。对来自CMV的β2.7基因的mRNA，通过使用可特异扩增的寡核苷酸引物的组合，由这些寡核苷酸引物组合构成的RNA扩增步骤，使用嵌入性荧光色素标记的寡核苷酸探针进行测定的检测法，解决上述课题。

主权项

1.对来自CMV的mRNA的扩增方法，其特征是：使用具有与来自样品中的巨细胞病毒(cytomegalovirus，以下缩写为CMV)的mRNA中特定序列的一部分互补的序列的第1引物以及具有与特定序列的一部分同源的序列的第2引物(这里第1或第2引物中的任一引物是在其5’末端侧附加RNA聚合酶的启动子序列的引物)，进行(1)以单链RNA为模板，利用具有RNA依赖的DNA聚合酶活性的酶合成与特定序列互补的cDNA、(2)利用具有核糖核酸酶H活性的酶分解RNA-DNA双链中的RNA(生成单链DNA)、(3)以单链DNA作为模板，利用具有DNA依赖的DNA聚合酶活性的酶生成具有特定序列或与特定序列互补的序列和可转录RNA的启动子序列的双链DNA，以及(4)利用具有RNA聚合酶活性的酶生成以双链DNA为模板的RNA转录产物(该RNA转录产物变成了上述(1)的反应中的模板)，在对前期样品中CMV进行扩增的方法中，上述mRNA是来自CMV的β2.7基因的mRNA，上述第1引物是由序列编号6、7或8所示的任一碱基序列或其互补链中的至少10个连续碱基构成的寡核苷酸，上述第2引物是由序列编号3、4或5所示的任一碱基序列或其互补链中的至少10个连续碱基构成的寡核苷酸。