[发明专利]含毛囊人工皮肤的制备方法

摘要

一种含毛囊人工皮肤的制备方法，通过以下步骤实现：分离鼠触须毛囊，加入分离酶消化，离心，得毛囊上皮细胞；取去除毛干的鼠触须毛囊用胶原酶D消化，离心，用DMEM培养基进行真皮鞘细胞培养和进行毛乳头细胞培养；将传代培养的细胞分别与毛囊上皮细胞按5－1∶1－5比例进行混合，移植到胶原/壳聚糖多孔支架上，加入DMEM培养基培养即得。本发明方法解决了大面积烧创伤中皮肤来源困难的难题。用发明制备的人工皮肤含有毛囊，具有一定的皮肤生理功能，具有一定的抗菌活性、不易收缩、可吸收的特点；为临床上大面积烧创伤患者提供创面覆盖的医用材料，促进创面的正常化愈合；本发明方法设计合理、操作方便，容易规模化生产。

主权项

1.含毛囊人工皮肤的制备方法，其特征是通过以下步骤实现：(1)毛囊上皮细胞制备：分离鼠触须毛囊，加入0.5％的分离酶，4℃，消化16～18小时，将毛囊移入D-Hanks液中，离心，从毛囊中挤出毛干，用0.125％胰蛋白酶加0.02％EDTA消化即成毛囊上皮细胞，5％新生牛血清D-Hanks液中止消化，吹散细胞，过筛，计数，离心；(2)毛乳头细胞培养：将去除毛干的鼠触须毛囊用0.3％的胶原酶D，37℃，消化4-6小时，D-Hanks液洗，离心，300rpm低速离心5分钟，吸沉淀过筛网，用DMEM培养基，37℃，5％CO2中进行毛乳头细胞培养；(3)含毛囊人工皮肤：将传代培养的毛乳头细胞与毛囊上皮细胞按5-1∶1-5比例的进行细胞混合，注射到胶原/壳聚糖多孔支架上，每一含毛囊细胞的胶原/壳聚糖多孔支架置入24孔培养板中，每孔加入DMEM培养基1mL培养，浸没培养2周后再行气液界面培养，培养8周后做苏木素伊红染色。