[发明专利]构建植物病毒弱病毒株的方法

摘要

本发明公开了一种构建植物病毒弱病毒株的方法。步骤如下：1)根据植物病毒卫星RNA两端保守序列，设计PCR引物，进行RT－PCR扩增，获得卫星RNA的cDNA，将全长卫星RNA的cDNA构建到质粒上，然后进行测序，确定其序列；2)将全长卫星RNA的cDNA或者序列改造后的cDNA进行体外转录，获得纯化的卫星RNA转录产物；3)预先接种强毒株至系统寄主，在接种叶或邻近叶片上，再接种上述体外转录的卫星RNA转录产物获得假重组，假重组后，取接种叶扩大接种，获得具备卫星RNA的弱病毒株。本发明的方法大大提高筛选植物病毒弱病毒株的速度，通过在cDNA水平上的卫星RNA序列改造，可以获得性状更优的卫星RNA变异株，提高卫星RNA介导的弱病毒保护效果，明显提高果实品质。

主权项

1.一种构建植物病毒弱病毒株的方法，其特征在于：方法步骤如下：1)根据植物病毒卫星RNA两端保守序列，设计PCR引物，进行RT-PCR扩增，获得卫星RNA的cDNA，将全长卫星RNA的cDNA构建到质粒上，然后按照常规分子克隆方法进行测序，确定其序列；2)将全长卫星RNA的cDNA进行体外转录，获得纯化的卫星RNA转录产物；3)预先接种强毒株至系统寄主，2-55天，在接种叶或邻近叶片上，再接种上述体外转录的1种或2-20种卫星RNA转录产物，获得假重组；或者将转录的1种或2-20种卫星RNA转录产物，与辅助病毒的总RNA或从强病毒株侵染的植株组织中提取的总RNA，同时接种敏感的系统寄主，获得假重组。假重组后1-20天，取接种叶扩大接种，获得具备一个或者多个卫星RNA的弱病毒株。