[发明专利]一种应用同源参照引物和同源参照模板的定量聚合酶链式反应方法

摘要

一种单管内参照定量聚合酶链式反应和反转录聚合酶链式反应。目标基因模板顺序和参照模板顺序同源，前者扩增产物长度比后者略长。目标基因引物和参照模板引物顺序也同源，他们的3“端碱基顺序相同，引物3”端碱基互补特性相同，引物的长度相同，引物的GC％相同，引物的发夹结构相同或仅有微小差异，引物的解链温度和与模板的结合强度也相同或仅有微小差异，所以目标基因模板和参照模板的扩增效率相同或非常接近。但是目标基因引物和参照模板引物之间有多个碱基错配，在相当宽的退火温度范围内不与非匹配模板退火相互之间没有干扰。发明克服了传统单管非竞争定量PCR目标基因和参照模板扩增效率不同的缺点。又克服了传统竞争定量PCR制备参照模板过程复杂，在不同阶段引物竞争状态不同所造成的测定不稳定等缺点。

主权项

1.一种应用同源参照引物和同源参照模板的定量聚合酶链式反应方法，由若干个反应管组成一组反应，每个反应管含相同量的含基因组DNA或cDNA的样品、不同稀释度的参照模板DNA、目标基因引物和参照引物各一对，PCR反应依次包括如下步骤：(1)DNA模板变性解链；(2)引物与模板退火；(3)在DNA聚合酶催化下延伸合成互补DNA链；按步骤(1)-(3)循环进行扩增反应；其特征在于参照模板与目标基因模板顺序同源，目标基因引物和参照引物顺序同源而且均不与对方模板退火。