[发明专利]一种转基因大豆的检测方法及所用引物

摘要

本发明涉及一种转基因大豆的检测方法及所用引物，该检测方法包括：1.提取大豆DNA；2.PCR扩增反应，体系的总体积为25μl，其各种成分及终浓度分别为：缓冲液10mM，dNTP0.2mM，Mg²⁺1.5mM，上下游引物各0.2mM，Taq1U，DNA50ng，用ddH₂O补齐到25μl，特定引物在特定的PCR反应条件反应；结束后，取体系液10μl，用2.0％的琼脂糖凝胶电泳检测，并照相记录；3.根据照相记录是否能显示扩增出一个337bp的特异带来判定是否为转基因大豆。所述引物包括上下游引物，分别为：F：5’－CACTGACGTAAGG GATGA－3 18ntTm：55.0，R：5’－TGTGCTGTAGCCACTGAT－3’18nt Tm：55.0。本发明一次PCR扩增反应即可同时检测出转基因大豆的35s启动子序列和EPSPS基因，节约时间，提高效率，降低成本，适于推广应用。

主权项

1.一种转基因大豆的检测方法，包括：(1).采用酚仿抽提法提取大豆DNA；(2).PCR扩增反应，PCR扩增反应体系的总体积为25μl，其各种成分及终浓度分别为：缓冲液10mM，dNTP0.2mM，Mg2+1.5mM，上下游引物各0.2mM，Taq 1U，DNA50ng，用ddH2O补齐到25μl；所述上下游引物序列为：F：5’-CACTGACGTAAGGGATGA-3’18nt Tm：55.0，R：5’-TGTGCTGTAGCCACTGAT-3’18nt Tm：55.0，PCR反应条件是： 被扩增外源基因 变性 扩增 循环 最终延伸 CaMV35s启动子与 EPSPS抗草甘膦基 因的复合片断 94℃，3min 94℃，20s 54℃，40s 72℃，1min 40 72℃，3minPCR反应结束后，取体系液10μl，用2.0％的琼脂糖凝胶电泳检测，并用紫外透射反射分析仪或UVI凝胶成像系统照相记录；(3).转基因大豆判定，根据所述照相记录是否能显示扩增出一个337bp的特异带来判定是否为转基因大豆。