[发明专利]人胎盘、脐带间充质干细胞库及其构建方法

摘要

本发明公开了一种人胎盘、脐带间充质干细胞库及其构建方法，本发明的构建步骤包括：(1)取人胎盘、脐带进行检测，用磷酸缓冲液冲洗涤后粉碎，加磷酸缓冲液稀释；(2)加入胶原酶消化；(3)加入磷酸缓冲液稀释；(4)加入胰酶消化；(5)将步骤(2)及步骤(4)所获得的细胞混合，离心，弃去上清液，用磷酸缓冲液洗涤，再离心，弃去上清液，即获得间充质干细胞；(6)将间充质干细胞置液氮冷冻，按其ABO/Rh分型和HLA分型进行保存，建立可供检索的细胞信息档案，即构建出人胎盘、脐带间充质干细胞库。本发明为新生儿储存胎盘及脐带间充质干细胞，为其本人、家属和他人提供间充质干细胞治疗疾病及其他应用。

主权项

1.一种人胎盘、脐带间充质干细胞库，其特征是由下述步骤建成：(1)取人胎盘、脐带进行ABO/Rh血型检测、HLA分型的检测、微生物免疫检测，用磷酸缓冲液冲洗去除残留血液，粉碎，加入1～1.5倍于粉碎物体积的磷酸缓冲液稀释；(2)加入步骤(1)所获得溶液体积的1/2～1/3的质量/体积比为0.05％～0.2％的胶原酶磷酸缓冲液溶液消化，温度为37℃，消化40～70分钟，过100-200目筛，将滤过的细胞混悬液与未消化组织分开；(3)向未消化组织中，加入1～1.5倍于未消化组织体积的磷酸缓冲液稀释；(4)加入步骤(3)所获得溶液体积的1/2～1/3的质量/体积比为0.05％～0.2％的胰酶磷酸缓冲液溶液消化，消化温度为37℃，消化时间为10～30分钟，在此100ml溶液中加入1-2g的血清终止胰酶作用，过100-200目筛，滤过液为细胞混悬液；(5)将步骤(2)及步骤(4)所获得的细胞混悬液混合，离心，弃去上清液，用磷酸缓冲液洗涤1～3次去除残余酶，再离心，弃去上清液，即获得间充质干细胞；(6)将间充质干细胞置液氮冷冻，按其ABO/Rh分型和HLA分型进行保存，建立可供检索的细胞信息档案，即构建出人胎盘、脐带间充质干细胞库。