[发明专利]核酸扩增用引物以及利用该引物检查结肠癌的检查方法

摘要

本发明提供了能够简便识别基因中的CpG区中，特别是编码hMLH1的基因的启动子区域中的CpG区中有无甲基化的方法，用于该方法的引物、引物组、检查用试剂以及检查用试剂盒。本发明的方法使用以下至少两种引物，即特异识别象hMLH1基因那样的解析对象基因(DNA)中任一CpG区的已被甲基化的胞嘧啶的引物，以及不管有无上述甲基化，仍与目的基因中的任一区域结合，对存在上述任一CpG区的区域通过核酸扩增形成扩增产物的引物，以及同时一起使用与这两种引物一起能够扩增含有上述CpG区的区域的其它甲基化非特异的引物。

主权项

1.核酸扩增用引物，其选择以下1)～10)中任一项所述的寡核苷酸中的至少一个：1)由含有一个或以上处于序列编号1表示的编码hMLH1的基因的启动子区中的CpG区、上述CpG区中存在的胞嘧啶以外的胞嘧啶被变换为胸腺嘧啶或尿嘧啶的碱基序列构成的寡核苷酸；2)由与含有一个或以上处于序列编号1表示的编码hMLH1的基因的启动子区中的CpG区、上述CpG区中存在的胞嘧啶以外的胞嘧啶被变换为胸腺嘧啶或尿嘧啶的碱基序列互补的碱基序列构成的寡核苷酸；3)由含有一个或以上处于序列编号1表示的编码hMLH1的基因的启动子区中的CpG区、上述CpG区中存在的胞嘧啶以及CpG区以外的胞嘧啶被变换为胸腺嘧啶或尿嘧啶的碱基序列构成的寡核苷酸；4)由与含有一个或以上处于序列编号1表示的编码hMLH1的基因的启动子区中的CpG区、上述CpG区中存在的胞嘧啶以及CpG区以外的胞嘧啶被变换为胸腺嘧啶或尿嘧啶的碱基序列互补的碱基序列构成的寡核苷酸；5)由序列编号2～7表示的碱基序列构成的寡核苷酸；6)由含有一个或以上处于序列编号1表示的编码hMLH1的基因的启动子区序列的互补链中的CpG区、上述CpG区中存在的胞嘧啶以外的胞嘧啶被变换为胸腺嘧啶或尿嘧啶的碱基序列构成的寡核苷酸；7)由与含有一个或以上处于序列编号1表示的编码hMLH1的基因的启动子区序列的互补链中的CpG区、上述CpG区中存在的胞嘧啶以外的胞嘧啶被变换为胸腺嘧啶或尿嘧啶的碱基序列互补的碱基序列构成的寡核苷酸；8)由含有一个或以上处于序列编号1表示的编码hMLH1的基因的启动子区序列的互补链中的CpG区、上述CpG区中存在的胞嘧啶以及CpG区以外的胞嘧啶被变换为胸腺嘧啶或尿嘧啶的碱基序列构成的寡核苷酸；9)由与含有一个或以上处于序列编号1表示的编码hMLH1的基因的启动子区序列的互补链中的CpG区、上述CpG区中存在的胞嘧啶以及CpG区以外的胞嘧啶被变换为胸腺嘧啶或尿嘧啶的碱基序列互补的碱基序列构成的寡核苷酸；以及10)由上述1)至9)任一项所述的寡核苷酸的碱基序列中替换、缺失、插入或添加1至多个碱基的所谓变异后的碱基序列构成，具有可对CpG区胞嘧啶的甲基化进行检测的引物功能的寡核苷酸。