[发明专利]使用短dsRNA序列在植物中进行有效的基因沉默

摘要

提供了当使用具有长度短于大约200个碱基对的茎区的dsRNA序列时增加基因沉默功效的方法和手段，具体方法为提供编码这类dsRNA序列的嵌合基因，所述嵌合基因具有由DNA依赖性RNA聚合酶III识别的启动子，所述启动子包含与DNA依赖性RNA聚合酶III相互作用的所有顺式作用启动子元件。

主权项

1.用于在植物细胞中降低目的基因表达的方法，其包括下列步骤：(a)给所述植物细胞提供嵌合基因，所述嵌合基因包括下列有效连接的DNA片段：i)启动子，所述启动子是由所述植物细胞的DNA依赖性RNA聚合酶III识别的启动子，其特征在于所述启动子是包含与所述DNA依赖性RNA聚合酶III相互作用的所有顺式作用启动子元件的III型启动子；ii)DNA片段，当所述DNA片段转录时，产生RNA分子，所述RNA分子包含有义和反义核苷酸序列，(1)所述有义核苷酸序列包含与转录自所述目的基因的RNA的大约19个连续核苷酸序列的核苷酸序列大约有90到100％序列一致性的大约19个连续核苷酸；(2)所述反义核苷酸序列包含与所述有义序列的大约19个连续核苷酸序列的核苷酸序列的互补序列有大约90到100％序列一致性的大约19个连续核苷酸；其中所述有义和反义核苷酸序列能形成大约19-200个核苷酸长度的双链RNA；和iii)寡聚dT片段，所述寡聚dT片段含有至少4个连续T残基；并且(b)鉴定植物细胞，所述植物细胞中目的基因的表达与不包含所述嵌合基因的植物细胞中目的基因的表达相比被降低。