[发明专利]一种检测空肠弯曲菌的方法

摘要

本发明涉及空肠弯曲菌的荧光PCR检测，提供一种空肠弯曲菌的实时荧光PCR检测方法，应用抗血清和磁性微珠制备空肠弯曲菌免疫磁珠，利用免疫磁珠直接捕获检样中的空肠弯曲菌，煮沸法提取空肠弯曲菌的DNA，设计合成用于扩增空肠弯曲菌鞭毛蛋白A(flaA)基因的引物与探针和/或空肠弯曲菌的马尿酸酶(hipO)基因的引物与探针，通过荧光PCR技术检测得到扩增产物的荧光信号；其中flaA基因的引物序列为flaA1：5’－ctgaatttgataccttaagtgcagc－3’/flaA2：5’－aggcacgcctaaacctatagct－3’，探针序列为5’－tgtgaaagaatttatcctaaagatgagcaaggaga－3’hipO基因引物序列为hipO 1：5’－tgcttctttacttgttgtggcttt－3’/hipO2：5’－gctcctatgcttacaactgctgaatt－3’，探针序列为5’－caaagcatagtatctcgcaatgttgatcccc－3’，本发明为畜禽等食品中的空肠弯曲菌的检测提供快捷方法。

主权项

1、一种检测空肠弯曲菌的方法，利用抗血清免疫磁珠直接捕获检样中的空肠弯曲菌，磁珠捕获的细菌进行DNA抽提，其特征在于：设计合成用于扩增空肠弯曲菌鞭毛蛋白A(flaA)基因的引物与探针和/或空肠弯曲菌马尿酸酶(hipO)基因的引物与探针，通过荧光PCR技术检测得到扩增产物相应的荧光信号；其中flaA基因的引物序列为flaA1：5’-ctgaatttgataccttaagtgcagc-3’/flaA2：5’-aggcacgcctaaacctatagct-3’，探针序列为5’-tgtgaaagaatttatcctaaagatgagcaaggaga-3’；hipO基因引物序列为hipO1：5’-tgcttctttacttgttgtggcttt-3’/hipO2：5’-gctcctatgcttacaactgctgaatt-3’，探针序列为5’-caaagcatagtatctcgcaatgttgatcccc-3’，所有探针的5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团，二者可构成能量传递结构。