[发明专利]运用组织培养获得龙须菜优良种苗的方法

摘要

本发明涉及海藻组织培养、海藻遗传选育及养殖，运用组织培养技术获得龙须菜优良种苗的方法。本发明通过龙须菜野生种的筛选，对其不同组织部位进行筛选及培养；在适宜的光照、温度及培养基条件下，获得具有优良性状的龙须菜，步骤为：1)通过龙须菜藻体不同部位的筛选及处理，获得顶端及分枝部的藻体组织，可用于龙须菜的快速繁殖及种苗培养；2)在光照培养箱内进行组织培养；3)培养基组分：半固体培养基及液体ES富营养培养基；4)夹苗及海上养殖；5)生长速率的测定；6)琼胶的提取及凝胶强度的测定。采用本发明获得优良性状的龙须菜，用于养殖生产，龙须菜的日生长率为10－13％，凝胶强度为800～1000g/cm²。

主权项

1、一种运用组织培养获得龙须菜优良种苗的方法，其特征在于：通过龙须菜野生种的筛选，对藻体不同组织部位进行取材及处理、组织培养，在光照、温度及培养基的条件下，获得具有优良性状的龙须菜；具体步骤如下：1)通过对龙须菜藻体顶端、中部、分枝部及基部的剪切，先去除藻体表面的附着物及杂藻，进行灭菌处理；然后在琼脂半固体培养基上培养，待生长出幼芽后，将生长出的幼苗转移到液体ES富营养培养基上培养，经过30-40天培养，获得顶端及分枝部的龙须菜组织；其中，半固体培养基的制备过程为：将琼脂1-1.5％(w/v)制成平板培养基，加过滤消毒海水，该海水中含1-1.5ppm NO3-、0.1-0.3ppm PO43-，液体ES富营养培养基按以下配方混制而成：按重量份数计，蒸馏水，90-110份；NaNO3，300-400份；甘油磷酸钠，45-55份；乙二胺四己乙酸铁，2.0-2.8份，其中铁与乙二胺四己乙酸的摩尔比为1∶1；PII金属元素溶液20-30份；PII金属元素溶液的制备是在100份蒸馏水中溶解350-360份Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O和280-320份乙二胺四己乙酸二钠，维生素B12，0.01-0.03份；维生素B1，0.2-0.7份；生物素，0.005-0.008份；三羟甲氨基甲烷钠，500-550份；H3BO3，110-120份；FeCl3·6H2O，4.0-5.0份；MnSO4·4H2O，15.0-17.0份；ZnSO4·7H2O，1.5-2.5份；CoSO4·7H2O，0.40-0.50份；乙二胺四已乙酸二钠，90-110份，调节pH到7.5-8.0，每100mL消毒海水中加ES加富营养液2-5mL的培养液，然后再用于组织培养；2)在光照培养箱内进行组织培养：培养液采用液体ES富营养培养基，光照强度18-25 uE.m-2.s-1；温度20-25℃；光周期L∶D＝12∶12，培养液每4-5天更换1次，培养时间为35-40天；3)夹苗及海上养殖：生长出的小幼苗，在室内夹苗于维尼龙绳上，培养温度20-25℃，使用过滤消毒海水，并在其中加入含1ppmNO3-、0.1ppmPO43-的氮磷营养盐，经过40-50天的培养，再将藻体取下，转移到养殖用的苗上，转移到海上养殖。