[发明专利]一种ATP、NAD及相关酶和底物的分析方法

摘要

本发明涉及一种辅酶和辅酶相关酶及底物的分析技术。分析使用的核酸连接系统由分子信标核酸探针，核酸片段以及以NAD为辅酶的核酸连接酶在相应的缓冲溶液中组成；NAD、相关酶及底物的分析在无NAD的缓冲液中进行，ATP的分析在无ATP的缓冲液中进行，分析在相应的连接体系缓冲液中加入分子信标、连接酶和两条或两条以上配对的核酸链，在37℃温育，监测荧光强度，得荧光稳定后加入待测的NAD、ATP、相关酶或底物，记录荧光强度的变化。本发明对辅酶ATP、NAD、相关酶和底物的检测分析快速、灵敏、准确、操作简单、投入少，具有重要的科学价值和广阔的市场前景，有较大的社会效益和经济效益。

主权项

1、一种ATP、NAD及相关酶和底物的分析方法，其特征在于该方法使用的核酸连接系统由环部与核酸片段序列相匹配、尾部一端带有荧光标记另一端带有荧光标记或者荧光熄灭基团的分子信标核酸探针，与分子信标环部配对的两个或两个以上核酸片段以及以NAD为辅酶的DNA或RNA核酸连接酶在相应的无NAD或无ATP的连接体系缓冲溶液中组成，(1)NAD分析方法为：在无NAD的连接体系缓冲液中加入分子信标、连接酶和两条或两条以上配对的核酸链，在37℃温育，同时监测荧光强度，待荧光稳定后分别加入NAD样品，观察并记录荧光强度的变化，(2)ATP分析方法为：在无ATP的连接体系缓冲液中加入分子信标、连接酶和两条或两条以上配对的核酸链，在37℃温育，同时监测荧光强度，待荧光稳定后加入ATP，观察并记录荧光强度的变化，(3)相关酶分析方法为：在无NAD的连接体系缓冲液中加入分子信标、连接酶、两条或两条以上配对的核酸链、NADH和酶反应底物，在37℃温育，同时监测荧光强度，待荧光稳定后加入相关酶，观察并记录样品荧光强度的变化，(4)底物的分析方法为：在无NAD的连接体系缓冲液中加入分子信标、连接酶、两条或两条以上配对的核酸链、NADH和相关酶，在37℃温育，同时监测荧光强度，等荧光稳定后加入酶反应底物，观察并纪录样品荧光强度的变化。