[发明专利]体外扩增特定环形或串联体核酸的方法无效
| 申请号： | 200410035814.5 | 申请日： | 2004-09-17 |
| 公开（公告）号： | CN1616669A | 公开（公告）日： | 2005-05-18 |
| 发明（设计）人： | 汪小龙;包振民;胡景杰;张全启;吕翠仙 | 申请（专利权）人： | 包振民;汪小龙 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34 |
| 代理公司： | 青岛联智专利商标事务所有限公司 | 代理人： | 李伦波 |
| 地址： | 26600*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种体外扩增特定环形或串联核酸的方法，将含有目标序列的环形核酸或线性串联核酸作模板、一对5’磷酸化的寡核苷酸引物、四种三磷酸脱氧核糖核苷酸、耐热核酸连接酶和耐热核酸聚合酶，以及适当的缓冲体系，在90℃～99℃预变性1至30分钟后，再进行1至40个热循环处理。所述热循环包括如下三个步骤：(1)变性：保温于90～99℃，持续时间1秒至5分钟；(2)复性和连接：保温于30～85℃，持续时间10秒到15分钟；(3)延伸：保温于65～85℃，持续时间1分钟到30分钟。本发明能快速有序的在体外产生和扩增环形或串联DNA，并可选择性地扩增环形或串联DNA。 | ||
| 搜索关键词： | 体外 扩增 特定 环形 串联 核酸 方法 | ||
【主权项】：
1、一种体外扩增特定环形或串联核酸的方法，将含有目标序列的环形核酸或线性串联核酸作模板、一对5’磷酸化的寡核苷酸引物、四种三磷酸脱氧核糖核苷酸、耐热核酸连接酶和耐热核酸聚合酶，以及适当的缓冲体系，在90℃～99℃预变性1至30分钟后，再进行1至40个热循环处理，所述耐热核酸连接酶和耐热核酸聚合酶在所述预变性步骤前或者预变性步骤后加入均可，所述热循环包括如下三个步骤：(1)变性：保温于90～99℃，持续时间1秒至5分钟；(2)复性和连接：保温于30～85℃，持续时间10秒到15分钟；(3)延伸：保温于65～85℃，持续时间1分钟到30分钟。
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