[发明专利]一种用短串联重复序列位点等位基因阶梯的个体识别DNA鉴定方法及其检测试剂盒

摘要

本发明公开一种用短串联重复序列位点等位基因阶梯的个体识别DNA鉴定方法及其检测试剂盒，其特征是采用三色荧光标记STR位点等位基因阶梯的制备技术，步骤如下：筛选用于个体识别DNA检测的STR位点；设计合成特异PCR扩增普通引物和分组荧光标记引物；收集人体组织样本；提取人基因组DNA；进行PCR反应；电泳检测扩增片段，割胶纯化；将PCR产物连接到载体上，得到各不同等位基因的克隆；用对应的荧光标记引物对每个等位基因进行PCR，制备不同的各等位基因；根据扩增产物的荧光值检测定量各等位基因；混合各STR位点的各等位基因的PCR扩增产物，加入试剂稳定剂，即可得到等位基因阶梯，该等位基因阶梯用于个体识别DNA荧光检测试剂盒，达到基因分型识别的功能。本发明无需反复收集具有不同基因型个体的血标本，具有制作简便、成本低、稳定性好。

主权项

1.一种用短串联重复序列位点等位基因阶梯的个体识别DNA鉴定方法，其特征在于采用三色荧光标记STR位点等位基因阶梯的制备技术的步骤：调查STR位点在中国人群及其他人群中的等位基因分布及其频率；筛选16至20个STR位点用于个体识别DNA检测；设计合成所选各STR位点的特异PCR扩增普通引物和分组荧光标记引物，荧光标记分三组，分别为蓝色、绿色、黄色；调查收集含有所选各STR位点的不同等位基因的人体组织样本；从人有核细胞中提取人基因组DNA；利用提取的DNA和合成的普通引物分别对各STR位点进行PCR反应；电泳检测扩增片段，割胶纯化；将PCR产物连接到载体上，得到各STR位点不同等位基因的克隆；将单克隆转化到大肠杆菌中，得到含有各等位基因的质粒；利用质粒模板将每个等位基因用对应的荧光标记引物分别进行PCR，制备不同的各等位基因；根据各个PCR扩增产物的荧光值检测定量各等位基因；按比列等摩尔量混合各STR位点的各等位基因的PCR扩增产物，用荧光检测法测定，调节各产物的比例，加入试剂稳定剂，即可得到等位基因阶梯。