[发明专利]大额牛精液低温冷冻保存方法

摘要

本发明涉及一种大额牛精液低温冷冻保存方法，属生物技术领域。本发明利用滴冻法对大额牛精液进行冷冻保存。冷冻液的配方为卵黄15％－20％v/v、甘油3％－6％v/v、乳糖1.0M－1.5M和蔗糖1.0M－1.5M；防冻液与精液稀释比例为1∶10、稀释后的精液放置在室温下平衡1小时，再转移到4℃冰箱中平衡3小时；冷冻精液的品质判定指标为：解冻复速率不低于70％；精子体外存活时间在解冻后放入37℃、5％CO₂培养箱中进行培养1小时后，运动度不小于30％；金黄地鼠裸卵穿透率不低于38％；精液在50mOsm/kg的低渗溶液中，38℃的5％CO₂培养相中培养1小时，精子肿胀率不低于39％。本发明具有实用且效果可靠，提供的大额牛冷冻精液品质的评定方法和判定指标科学、规范等优点。

主权项

1、大额牛精液低温冷冻保存方法，包括精液的采集、检查、防冻液配置、精液的稀释、精液的冷冻和保存、冷冻精液的解冻、冷冻精液的品质评定步骤，其特征在于：(1)冷冻液的配方为卵黄15％-20％v/v，甘油3％-6％v/v，乳糖1.0M-1.5M，蔗糖1.0M-1.5M，其余为超纯水；(2)精液的稀释为将冷冻液预热到37℃，按防冻液∶精液稀为1∶10进行稀释，稀释后的精液放置在室温下平衡1小时，再转移到4℃冰箱中平衡3小时；(3)精液的冷冻采用滴冻法，即在干冰上或在预冷到-80℃左右的铜板上滴0.2m的精液，当滴在干冰上或铜板上的精液滴硬化且表面变光亮5-7分钟后，放入液氮中保存；(4)冷冻精液的品质判定指标为：解冻复速率不低于70％；精子体外存活时间在解冻后放入37℃、5％CO2培养箱中进行培养1小时后，运动度不小于30％；金黄地鼠裸卵穿透率不低于38％；精液在50mOsm/kg的低渗溶液中，38℃的5％CO2培养相中培养1小时，精子肿胀率不低于39％。