[发明专利]适合转基因棉花等外源基因检测的内标准基因及其应用

摘要

本发明涉及适合于转基因棉花、番茄、水稻、油菜外源基因定性、定量PCR检测及拷贝数分析的内标准基因及其应用。本发明依据内标准基因的种内非特异性、种间特异性、单拷贝或低拷贝数，通过生物信息学分析和分子生物学实验验证，在棉花、番茄、水稻和油菜中寻找到4个内标准基因，分别为棉花的SADI、番茄的LAT52、水稻的SPS和油菜的HMGI/Y基因。应用PCR方法进行了这些内标准基因的检测灵敏度和精确度实验验证。同时依据这些内标准基因分别建立了转基因棉花、番茄、水稻和油菜外源基因的定性、定量PCR检测系统；根据内标准基因的恒定拷贝数，建立转基因水稻、油菜、棉花、番茄的外源基因拷贝数的荧光定量PCR检测分析平台。

主权项

1.适合转基因棉花等外源基因检测的内标准基因，包含编码油菜高效移动蛋白HMG I/Y基因(high mobility group protein I/Y)、棉花内源基因SadI(stearoyl-ACP desaturase)、番茄内源基因Lat52和水稻SPS(sucrose phosphate synthase)基因、并根据这些内标准基因设计定性、定量PCR检测的外源基因的引物和探针，其中，所述HMG I/Y基因的长度为143个bp的DNA片段，SadI基因的长度为106个bp的DNA片段，Lat52基因的长度为91个bp的DNA片段，水稻SPS基因的长度为81bp的DNA片段。