[发明专利]优化的多表位构建体及其应用

摘要

本发明涉及生物学领域。更具体地，它涉及多表位核酸和肽疫苗以及设计这种疫苗来提供增强的免疫原性的方法。

主权项

1.多核苷酸，其含有：(a)多表位构建体，其含有编码乙型肝炎病毒(HBV)细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位pol 562，pol 745，env 332，pol 530，pol 388，env249，env 359，pol 640，env 335，env 183，env 313，核心117，核心19，核心18，核心419，pol 392，pol 531，pol 415，pol 47，pol455，核心141，pol 429，env 236，pol 166，pol 538，核心101，pol354和核心137(即每个HBV CTL表位由表7中的相关序列组成)的核酸，其中该核酸直接或间接地在相同阅读框中互相连接；(b)(a)中的多表位构建体，其还含有编码HBV CTL表位pol 665(即表7中的pol 665表位)的核酸，该核酸在相同阅读框中直接或间接地连接到(a)的CTL表位核酸；(c)多表位构建体，其含有编码乙型肝炎病毒(HBV)细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位pol 149，核心18，pol 562，pol 538，pol 455，env183，核心141，pol 665，env 335，env 313，pol 354，pol 629，核心19，pol 150，pol 47，pol 388，pol 531和pol 642的核酸，其中该核酸直接或间接地在相同阅读框中互相连接；(d)(a)或(b)或(c)的多表位构建体，其还含有1个或多个间隔核酸，该间隔核酸在相同阅读框中直接或间接地连接到CTL表位核酸；(e)(d)的多表位构建体，其中该1个或多个间隔核酸位于(a)的CTL表位核酸之间、(a)和(b)的CTL表位核酸之间、(a)和(b)与(a)、(c)的CTL表位核酸之间、或(c)的CTL表位核酸之间；(f)(d)或(e)的多表位构建体，其中该间隔核酸编码长为1～8个残基的氨基酸序列；(g)(d)至(f)中的任一项的多表位构建体，其中2个或多个间隔核酸编码不同的(即不相同的)氨基酸序列；(h)(d)至(g)中的任一项的多表位构建体，其中2个或多个间隔核酸编码与其它间隔核酸编码的氨基酸序列不同的氨基酸序列；(i)(d)至(h)中的任一项的多表位构建体，其中2个或多个间隔核酸编码相同的氨基酸序列；(j)(d)至(i)中的任一项的多表位构建体，其中1个或多个间隔核酸编码含有3个连续丙氨酸(Ala)残基或由3个连续丙氨酸残基组成的氨基酸序列；(k)(a)至(j)中的任一项的多表位构建体，其还含有1个或多个编码HTL表位的核酸，该核酸在相同阅读框中直接或间接地连接到CTL表位核酸和/或间隔核酸；(l)(k)的多表位构建体，其中该HTL表位是PADRE_表位；(m)(k)的多表位构建体，其中该HTL表位是HBV HTL表位；(n)(m)的多表位构建体，其中该HBV HTL表位选自pol 774，pol694，pol 145，核心50，pol 385，pol 523，env 339，pol 501，pol420，pol 412，env 180，核心120，pol 96，pol 618，pol 767，和pol 664(即每个HBV HTL表位由表11中的相关序列组成)；(o)(k)至(n)中的任一项的多表位构建体，其还含有1个或多个在CTL表位和HTL表位之间或在HTL表位之间的间隔核酸；(p)(a)至(o)中的任一项的多表位构建体，其还含有1个或多个I类MHC和/或II类MHC靶向核酸；(q)(p)的多表位构建体，其中该靶向核酸编码选自下列的靶向序列：Igκ信号序列，组织纤溶酶原激活剂信号序列，胰岛素信号序列，内质网信号序列，LAMP-1溶酶体靶向序列，LAMP-2溶酶体靶向序列，HLA-DM溶酶体靶向序列，HLA-DO的HLA-DM-关联序列，Ig-α细胞质结构域，Ig-β细胞质结构域，Ii蛋白，流感基质蛋白，HBV表面抗原，HBV核心抗原和酵母Ty蛋白；(r)(a)至(q)中的任一项的多表位构建体，其是对CTL和/或HTL表位加工优化过的；(s)(a)至(r)中的任一项的多表位构建体，其中该CTL核酸经过筛选，以使CTL和/或HTL连接表位的数量最小化；(t)(k)至(s)中的任一项的多表位构建体，其中该HTL核酸经过筛选，以使CTL和/或HTL连接表位的数量最小化；(u)(a)至(t)中的任一项的多表位构建体，其含有1个或多个编码1个或多个侧翼氨基酸残基的核酸；(v)(u)的多表位构建体，其中该1个或多个侧翼氨基酸残基选自：位于CTL表位核酸的C+1位置的K，R，N，Q，G，A，S，C和T；(w)(a)至(v)中的任一项的多表位构建体，其中该HBV CTL核酸以图27A所示的次序连接；(x)(n)至(w)中的任一项的多表位构建体，其中该HBV HTL核酸以图28A所示的次序连接；(y)(c)至(v)或(x)中的任一项的多表位构建体，其中该HBV CTL核酸以图34所示的次序连接；(z)(a)至(x)中的任一项的多表位构建体，其编码含有图24B或表13、14、18或19所示的氨基酸序列或由其组成的肽；(aa)(z)的多表位构建体，其含有选自下列的核酸序列：表13中的核苷酸序列的核苷酸+1至1248，表14中的核苷酸序列的核苷酸+1至1032，图24C中的核苷酸序列，表18中的核苷酸序列的核苷酸+1至2292和表19中的核苷酸序列的核苷酸+1至2232；(bb)(c)至(v)或(x)或(y)或(z)中的任一项的多表位构建体，其编码含有表23或24所示的氨基酸序列或由其组成的肽；(cc)(bb)的多表位构建体，其含有选自下列的核酸序列：表23中的核苷酸序列的核苷酸+1至618，或表24中的核苷酸序列的核苷酸+1至657；(dd)(a)至(cc)中的任一项的多表位构建体，和1个或多个调控序列；(ee)(a)至(dd)中的任一项的多表位构建体，和1个或多个IRES；(ff)(a)至(ee)中的任一项的多表位构建体，和1个或多个启动子；(gg)(a)至(ff)中的任一项的多表位构建体，和1个或多个CMV启动子；(hh)(a)至(gg)中的任一项的多表位构建体，和2个或多个CMV启动子；(ii)(a)至(hh)中的任一项的多表位构建体，和载体；(jj)(ii)的多表位构建体，其中该载体是表达载体；(kk)(a)至(jj)中的任一项的多表位构建体，其具有图29A(i)、(ii)或(iii)所示的多表位构建体的结构。