[发明专利]体外构建同种生物心脏组织工程瓣膜的一种方法

摘要

本发明包括利用经液氮保存的同种主动脉带瓣管道作为生物瓣支架，用0.1％SDS脱去瓣膜表面的内皮细胞；来源于成人骨髓间充质干细胞经体外定向诱导分化的内皮细胞作为种植细胞，高密度(＞1.2×10⁵/cm²)地种植于瓣膜支架上；种植细胞与生物瓣支架复合体静态培养20天。分别在静态培养的第7、14和20天进行0.5％硝酸银染色和扫描电镜观察、摄片，以确定其再内皮化程度。结果显示种植细胞与生物瓣支架复合体静态培养的第7、14、20天，其再内皮化程度分别为73％、85％和92％。结果证明我们体外构建的同种生物心脏组织工程瓣是一种有效方法，为下一步脉动流培养，以及动物移植实验和临床应用提供了材料基础。

主权项

1.体外构建同种生物心脏组织工程瓣的一种方法。其特征在于生物瓣支架选择经液氮保存的同种主动脉带瓣管道，用0.1％SDS脱去瓣膜表面的内皮细胞，并且用纤维连接蛋白(Fn，80μg/ml)预覆盖瓣膜支架；来源于成人骨髓间充质干细胞经体外定向诱导分化的内皮细胞作为种植细胞，高密度(＞1.2×105/cm2)地种植于瓣膜支架上；种植细胞与生物瓣支架复合体静态培养20天。分别在静态培养的第7、14和20天进行硝酸银染色和扫描电镜观察、摄片，以确定其再内皮化程度。实验结果显示同种生物瓣支架表面的内皮细胞完全脱去，而细胞外基质的主要成份弹力纤维和胶原纤维保存良好；骨髓间充质干细胞体外诱导分化的内皮细胞与生物瓣支架复合体静态培养的第7、14、20天，其再内皮化程度分别为73％、85％和92％。实验结果证明我们体外构建的同种生物心脏组织工程瓣基本上实现了再内皮化的预期目标，是一种心脏瓣膜组织工程学研究的有效方法。