[发明专利]用于培育肉苁蓉愈伤组织的悬浮细胞培养系的构建方法

摘要

本发明涉及一种用于培育肉苁蓉愈伤组织的细胞悬浮培养系的构建方法为：将固体培养基上生长的由肉苁蓉种子诱导得到的愈伤组织转移到添加2，4－D0.5－10mg/L的B5固体培养基进行继代培养形成的浅黄色，半透明，松软易碎的愈伤组织，再转接到相同组分和含量的液体培养基中，控制适当的培养条件并进行多次继代培养，便得到本发明稳定的用于培育肉苁蓉愈伤组织的细胞悬浮培养系，该细胞悬浮培养系生长良好，次级代谢产物含量高，可以达到肉苁蓉愈伤组织的工业化规模培育生产的目的。

主权项

1.一种用于培育肉苁蓉愈伤组织的细胞悬浮培养系的构建方法，其步骤如下：1)将固体培养基上生长的由肉苁蓉种子诱导得到的愈伤组织转移到添加了0.5-10mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸的B5固体培养基上进行继代培养，形成浅黄色、半透明、松软易碎的肉苁蓉愈伤组织；2)将步骤1)中得到的肉苁蓉愈伤组织转接到与步骤1)中所使用的B5固体培养基相同组分和含量的液体培养基中，使聚集成块的愈伤组织分散为单个细胞或细胞聚集体进行摇瓶培养；培养时摇床转速为60-120r/min，温度为20-30℃，光照强度为1000-3000lux，光照时间8-20小时/天；3)每5-15天进行一次继代培养，将颜色为白色至淡黄色，生命力旺盛的处对数生长期的肉苁蓉单细胞或小细胞团用无菌吸管转入新鲜液体培养基中，继代培养5-15次后，得到本发明稳定的用于培育肉苁蓉愈伤组织的悬浮细胞培养系；所述的新鲜液体培养基的组分和含量同步骤2)中使用的液体培养基。