[发明专利]一种用稀土元素促进新疆紫草愈伤组织生长的方法

摘要

本发明涉及使用稀土元素促进新疆紫草愈伤组织生长的方法：首先从新疆紫草外植体诱导出愈伤组织，愈伤组织继代若干次后，选出紫草素及其衍生物高产细胞系，通过将不同种类和不同浓度的稀土元素添加到固体培养基上，使新疆紫草的愈伤组织快速增殖，从而建立了从外植体出发，快速获得大量优质新疆紫草愈伤组织的培养体系，为实现工业规模生产紫草素及其衍生物奠定了基础。

主权项

1.一种使用稀土元素促进新疆紫草愈伤组织生长的方法，其特征在于，步骤如下：1)诱导新疆紫草愈伤组织将新疆紫草的外植体接种于含有植物激素的改良N6固体培养基I中进行诱导培育，10-30天后长出新疆紫草愈伤组织；所述的改良N6固体培养基I的组分和含量为：每1L的N6固体培养基中含有0.1-0.7mg的萘乙酸、0.1-0.7mg的2，4-二氯苯氧乙酸和0.5-4.0mg的激动素；2)将步骤1)诱导培育获得的新疆紫草愈伤组织置于改良N6固体培养基II中进行继代生长2-3个周期，每个周期的培养时间为10-30天；所述的改良N6固体培养基II的组分和含量为：每1L的N6固体培养基中含有含有0.5-5mg/L激动素；3)筛选高产紫草素及其衍生物的新疆紫草愈伤组织将步骤2)中继代生长2-3个周期的新疆紫草愈伤组织转接到合成培养基III上，在24-26℃温度和无光条件下培养16-25天后，测定并选出其紫草素及其衍生物含量比天然新疆紫草药材含量高出0.5倍的新疆紫草愈伤组织细胞系；所述的合成培养基III的配方为：KNO3(680mg/L)；NaH2PO4·2H2O(19mg/L)；NaSO4(1917mg/L)；CuCl2·2H2O(0.1364mg/L)；H3BO3(1.6mg/L)；FeSO4·7H2O(1.1mg/L)；NaEDTA·2H2O(1.5mg/L)；激动素(0.5mg/L)；肌醇(100mg/L)；蔗糖(50g/L)；琼脂(6g/L)；4)将步骤3)得到的新疆紫草愈伤组织细胞系置于步骤2)中所述的改良N6固体培养基II中进行10-25天的预培养；5)将步骤4)中经预培养的新疆紫草愈伤组织细胞系转入含有稀土元素La、Nd、Ce、和/或混合稀土的改良N6固体培养基IV中，培养10-30天；所述的改良N6固体培养基IV中La、Nd、Ce、和/或混合稀土含量为：每1L的N6固体培养基中La、Nd、Ce、和/或混合稀土含量为0.01-0.5mmol；所述混合稀土的成分和含量为：71.5％La2O3+25.9％CeO2+2.4％Pr6O11+0.2％Sm2O3，w/w。