[发明专利]人呼吸道合胞病毒荧光定量PCR试剂盒及其检测方法无效
| 申请号： | 200310111382.7 | 申请日： | 2003-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN1544656A | 公开（公告）日： | 2004-11-10 |
| 发明（设计）人： | 张楚瑜;张其威;游上游 | 申请（专利权）人： | 武汉大学;武汉市儿童医院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N33/52 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 43007*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人呼吸道合胞病毒(HumanRespiratory Syncytial Virus，HRSV)荧光定量PCR试剂盒及其检测方法，该试剂盒包括RNA提取液、逆转录酶、RNA酶抑制剂、逆转录反应液、标准阳性模板、Taq DNA聚合酶、荧光定量反应液和标准阴性参控液。利用该试剂盒，首先提取待测样品中病毒总RNA，逆转录成cDNA，然后与标准阳性模板一起作荧光定量PCR，根据荧光定量PCR仪器所带的软件计算出待测样品中呼吸道合胞病毒的起始浓度。本发明检测速度快，操作方便安全，省时效率高，可有效的对婴幼儿及成人病毒性呼吸道感染患者进行病毒RNA的检测，从而达到了早期诊断和有效预防呼吸道合胞病毒感染。 | ||
| 搜索关键词： | 呼吸道 病毒 荧光 定量 pcr 试剂盒 及其 检测 方法 | ||
【主权项】：
1、一种人呼吸道合胞病毒荧光定量PCR试剂盒，其特征是该试剂盒包括：(a)RNA提取液，使用Trizol一步法；(b)逆转录酶M-MLV，使用浓度为10-1000U每个反应体系；(c)RNA酶抑制剂，使用浓度为10-100U每个反应体系；(d)逆转录反应液，使用的引物P1为：5’TTAGCAAAGTCAAGTTGAATGAT 3’，使用浓度为0.1-10umol/L，还包括有RT 5×buffer溶液，dNTPs溶液，使用的浓度为0.1-10mmol/L和无菌双蒸水；(e)标准阳性模板，含有人呼吸道合胞病毒核衣壳N蛋白基因3’端195个碱基片段SEQ ID NO.1与PGEM-T Easy载体构成的PGEMT195重组质粒；(f)Hotstart Taq DNA聚合酶，使用浓度为1-10U每个反应体系；(g)荧光定量PCR反应液；(h)标准阴性参控液，即无模板荧光定量反应液，由(f)和(g)组成。
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